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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物设计
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火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

[交流] 引物设计 已有4人参与

我想从质粒中获取一段基因序列，设计引物（加酶切位点）
我该如何设计引物？
会不会导致出现扩增错误？如何提高试验的保真性？
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1楼 2013-01-19 16:27:09
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火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 16:35:45
这样说太笼统啦，你可以把什么质粒告诉大家，你自己可以先按自己的理解设计一对引物放上来，大家看看可不可行啊。

先前已经把目的基因（一段启动子序列）从植物cDNA文库中筛选出来（两端有酶切位点），连接在pMD18-T上。
   现在想换掉这两个酶切位点，改用其他的酶切位点。
用什么方式比较好呢？不会丢失碱基或错配
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3楼2013-01-19 16:42:48
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这样说太笼统啦，你可以把什么质粒告诉大家，你自己可以先按自己的理解设计一对引物放上来，大家看看可不可行啊。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2013-01-19 16:35:45
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你把原来的引物换个酶切位点不就完了吗？怎么会错配呢？
肯定不会有问题。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
4楼2013-01-19 17:53:38
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火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 17:53:38
你把原来的引物换个酶切位点不就完了吗？怎么会错配呢？
肯定不会有问题。

你是说再重新从cDNA中PCR？
还是再质粒上PCR？不会有错配吗？需要用高保真Taq酶么？
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5楼2013-01-19 18:02:16
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