应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物设计
101/1返回列表
查看: 1642  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

[交流] 引物设计 已有4人参与

我想从质粒中获取一段基因序列，设计引物（加酶切位点）
我该如何设计引物？
会不会导致出现扩增错误？如何提高试验的保真性？
回复此楼

» 猜你喜欢
翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
1楼 2013-01-19 16:27:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这样说太笼统啦，你可以把什么质粒告诉大家，你自己可以先按自己的理解设计一对引物放上来，大家看看可不可行啊。
赞一下 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2013-01-19 16:35:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 16:35:45
这样说太笼统啦，你可以把什么质粒告诉大家，你自己可以先按自己的理解设计一对引物放上来，大家看看可不可行啊。

先前已经把目的基因（一段启动子序列）从植物cDNA文库中筛选出来（两端有酶切位点），连接在pMD18-T上。
   现在想换掉这两个酶切位点，改用其他的酶切位点。
用什么方式比较好呢？不会丢失碱基或错配
赞一下 回复此楼
翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
3楼2013-01-19 16:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你把原来的引物换个酶切位点不就完了吗？怎么会错配呢？
肯定不会有问题。
赞一下 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
4楼2013-01-19 17:53:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 17:53:38
你把原来的引物换个酶切位点不就完了吗？怎么会错配呢？
肯定不会有问题。

你是说再重新从cDNA中PCR？
还是再质粒上PCR？不会有错配吗？需要用高保真Taq酶么？
赞一下 回复此楼
翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
5楼2013-01-19 18:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用质粒为模板就可以了。质粒几千bp，一般是不会有错配而导致非特意扩增的，只有基因组才会有这种可能。
有高保真酶就用高保真酶，片段不太长的话，没有也可以。
但不管用什么酶，克隆完后都需要测序验证。
赞一下 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
6楼2013-01-19 18:23:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物设计时换成你想要的酶切位点就可以了。如果质粒里的序列是经测序验证过的话，直接从质粒里P比较好，因为模板相对简单容易控制。如果基因片段比较长的话最好用高保真酶P，不长的话无所谓，不过P的时候不要采用太多的循环数目。
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-19 18:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
设计引物时在引物的上游加入你的酶切位点，注意末端多加一到两个保护性碱基（便于直接多PCR产物进行酶切）。建议从质粒上P，使用普通酶即可。实在不放心，可测序验证
赞一下 回复此楼
8楼2013-01-19 21:19:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fdjr

金虫 (著名写手)
原来的引物换个酶切位点，应该问题不大…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2013-01-20 00:17:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
好的！！谢谢各位了
回复此楼
翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
10楼2013-01-20 08:43:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 火舞精灵3 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +19 Lanmanbaby 2026-08-09 32/1600 2026-08-12 09:56 by gltch
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +5 Tide man 2026-08-11 5/250 2026-08-12 09:24 by kangban
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭