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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » C48/80刺激RBL-2H3细胞脱颗粒具体实验方案
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七星草

银虫 (小有名气)

[求助] C48/80刺激RBL-2H3细胞脱颗粒具体实验方案 已有1人参与

各位大侠，我最近在培养RBL-2H3细胞，以前实验室里从来没人做过这个细胞系，因此遇到了好多问题啊！
首先是细胞培养问题，我用的是GIBICO的MEM粉末培养基，加了15%的FBS，完全按照上海细胞库上面的培养基配方来的，可是每次传代后都有好些细胞会漂起来，而且有时候是成团的漂起来，不知道这是什么原因啊？我种的也不多啊

其次，是我用C48/80刺激的问题。我的实验方案如下：
细胞培养：取对数生长期细胞，调整浓度为2×105个/ml，以1ml/孔的量（2×105个/孔）接种于24孔板中，置37℃、5% CO2培养箱培养24 h后，各孔加入含不同浓度试药的培养液0.5ml（这里，我用过完全培养基配药，但酚红的影响比较大；用过PBS，加药组根本没反应，参考文献上的用台式液也没有反应，不知道是什么原因）。药物配制溶液（DMSO）为空白对照，总酶孔加入1%TritonX-100溶液裂解细胞，每个浓度3个复孔，设置6个空白对孔(加入相应的DMSO)，设置3个空白孔（无细胞），继续培养。
样本收集：细胞加药培养1h后，冰浴10min终止反应。将培养液全部吸取于1.5ml Ep管中，在4℃下3000转离心10min，吸取上清，200ul分装，储存于-20℃，待进行β-己糖胺酶检测。

我想问一下这个药物到底用什么稀释比较好啊？我看到文献上用改良台式液是可以做出来的啊，不知道为什么我却做不出来，郁闷之极，还请各位高人指教啊！！！小女子在此感激不尽！
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从一开始，我就错了
1楼 2013-01-19 12:08:13
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七星草

银虫 (小有名气)
智能机器人的回复没用啊，这些帖子我都搜过的
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从一开始，我就错了
2楼2013-01-19 12:09:08
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七星草

银虫 (小有名气)
没有人做过这个实验吗？
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从一开始，我就错了
3楼2013-01-21 15:37:15
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zhen真9

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我这有一篇C48/80刺激RBL-2H3的文献，希望对你有帮助。。。。
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4楼2013-03-14 10:45:44
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zhen真9

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

好运
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  • 附件 1 : QuercetinSensitizesRBL-2H3CellstoPolybasicMast.pdf
    • 2013-03-14 11:01:26, 522.1 K
5楼2013-03-14 10:47:26
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luckybobozai

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我用的是10%胎牛血清 配制的DMEM
关于悬浮，这个细胞生长很快，2天就要传一次代，不要长太满，还有个别漂浮很正常
配药我也是用台式液，应该出的啊 ，你用的什么药共孵育？孵育多久？
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永远的永远~~
6楼2013-04-03 16:40:32
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caify

银虫 (小有名气)
你好呀，我是南方医科大学的学生，请问你是哪个学校的呀？我也要做RBL_2H3的细胞，但是目前还没买细胞，以后有问题可以请教你么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2013-04-08 23:54:41
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萝卜-

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问你在哪里买的RBL-2H3细胞
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初来乍到多多关照
8楼2016-03-19 21:23:40
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lifei0122

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 七星草 at 2013-01-19 12:09:08
智能机器人的回复没用啊，这些帖子我都搜过的

哈哈哈哈哈
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9楼2017-08-18 10:07:32
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shushushu77

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhen真9 at 2013-03-14 10:47:26
好运

谢谢好心人
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10楼2018-03-23 09:44:52
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