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C48/80刺激RBL-2H3细胞脱颗粒具体实验方案 已有1人参与
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各位大侠，我最近在培养RBL-2H3细胞，以前实验室里从来没人做过这个细胞系，因此遇到了好多问题啊！ 首先是细胞培养问题，我用的是GIBICO的MEM粉末培养基，加了15%的FBS，完全按照上海细胞库上面的培养基配方来的，可是每次传代后都有好些细胞会漂起来，而且有时候是成团的漂起来，不知道这是什么原因啊？我种的也不多啊 其次，是我用C48/80刺激的问题。我的实验方案如下： 细胞培养：取对数生长期细胞，调整浓度为2×105个/ml，以1ml/孔的量（2×105个/孔）接种于24孔板中，置37℃、5% CO2培养箱培养24 h后，各孔加入含不同浓度试药的培养液0.5ml（这里，我用过完全培养基配药，但酚红的影响比较大；用过PBS，加药组根本没反应，参考文献上的用台式液也没有反应，不知道是什么原因）。药物配制溶液（DMSO）为空白对照，总酶孔加入1%TritonX-100溶液裂解细胞，每个浓度3个复孔，设置6个空白对孔(加入相应的DMSO)，设置3个空白孔（无细胞），继续培养。 样本收集：细胞加药培养1h后，冰浴10min终止反应。将培养液全部吸取于1.5ml Ep管中，在4℃下3000转离心10min，吸取上清，200ul分装，储存于-20℃，待进行β-己糖胺酶检测。 我想问一下这个药物到底用什么稀释比较好啊？我看到文献上用改良台式液是可以做出来的啊，不知道为什么我却做不出来，郁闷之极，还请各位高人指教啊！！！小女子在此感激不尽！ |
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