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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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tea_gl9871

铜虫 (正式写手)


[交流] 急求高手指点3'RACE结果!

本人做RACE的新手。打算用同源克隆方法克隆目标材料的NAC转录因子,设计了兼并引物,起初打算先扩增核心保守片段,但没成功;然后直接拿兼并引物和TAKARA RACE试剂盒的引物做了3‘,50ul体系做了两管,扩增退火55度,30个循环,结果如图1 ,并切下了红线标注的部分,做了切胶回收。同一天,做了连接18T载体,体系按照说明书要求。然后转DH5α感受态细胞,并在200转,37度摇菌过夜。第三天摇菌12小时后菌液PCR,结果如图2,可问题出现了,菌液PCR(20ul体系)的条带不单一,而且亮度较弱。和同学分析后,觉得有可能是试剂污染,就把所有PCR成分更换成新配或新购买的,又做了一次菌液PCR,期间又把菌液继续在200转,37度摇了7-8个小时,第二次菌液PCR的结果如图3,还是多条带,亮度是增加了,同时也做了阴性对照。
这是什么情况啊,急求有经验的虫友给指点迷津!感谢!

3\'RACE(图1).jpg



12小时菌液PCR(图2).jpg



更换所有成分后的菌液PCR(图3).jpg
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