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tea_gl9871

铜虫 (正式写手)

[交流] 急求高手指点3'RACE结果！

本人做RACE的新手。打算用同源克隆方法克隆目标材料的NAC转录因子，设计了兼并引物，起初打算先扩增核心保守片段，但没成功；然后直接拿兼并引物和TAKARA RACE试剂盒的引物做了3‘，50ul体系做了两管，扩增退火55度，30个循环，结果如图1 ，并切下了红线标注的部分，做了切胶回收。同一天，做了连接18T载体，体系按照说明书要求。然后转DH5α感受态细胞，并在200转，37度摇菌过夜。第三天摇菌12小时后菌液PCR，结果如图2，可问题出现了，菌液PCR（20ul体系）的条带不单一，而且亮度较弱。和同学分析后，觉得有可能是试剂污染，就把所有PCR成分更换成新配或新购买的，又做了一次菌液PCR，期间又把菌液继续在200转，37度摇了7-8个小时，第二次菌液PCR的结果如图3，还是多条带，亮度是增加了，同时也做了阴性对照。
这是什么情况啊，急求有经验的虫友给指点迷津！感谢！

3\'RACE(图1).jpg



12小时菌液PCR（图2）.jpg



更换所有成分后的菌液PCR（图3）.jpg
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1楼 2013-01-14 09:30:24
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