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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 突变体鉴定中col为什么总被P出来
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xuefei2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 突变体鉴定中col为什么总被P出来

最近我在做拟南芥的突变体鉴定，可是col总被P出来，换了别人的col还有buffer,dNTP，引物也是最近刚合成稀释的，可是还是有col被P出来，条带和目的条带一般大，郁闷啊，退回温度是按公式算的，延伸时间按每分钟1000bp计算的，寒假之前导师要求鉴定出来，请有经验的人帮帮忙啊，真的非常感谢~
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1楼 2013-01-08 00:22:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是鉴定T-DNA突变体吗？那个不是用三引物吗？野生型也是有带的，不过突变体的带型和野生型不一样。你指col被P出来是指什么？P出突变体的带了？
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2楼2013-01-08 08:32:40
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xuefei2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-08 08:32:40
你是鉴定T-DNA突变体吗？那个不是用三引物吗？野生型也是有带的，不过突变体的带型和野生型不一样。你指col被P出来是指什么？P出突变体的带了？

col也P出突变体的条带，如果P出其它不同的条带就不用管它了啊，你有什么建议吗？谢谢啊
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3楼2013-01-08 19:19:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

用的是什么引物，LB/LP/RP吗？PCR时是直接从叶子P的还是粗提的DNA？是不是模板污染了？
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4楼2013-01-09 07:59:05
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xuefei2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-09 07:59:05
用的是什么引物，LB/LP/RP吗？PCR时是直接从叶子P的还是粗提的DNA？是不是模板污染了？

用的LB,LP,RP，DNA是刚从叶片提的，Action P的也正常，换了好几个col为什么col 一直被P出目的条带啊
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5楼2013-01-09 15:14:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

是不是种植物的时候突变株的种子混到野生型里了？换用以前提的野生DNA试试。
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6楼2013-01-10 07:05:31
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carotene

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知道楼主后来解决了这个问题没有？我现在也遇到了同样的问题，呵呵
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7楼2013-03-28 07:37:36
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