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蛋白的表达量低不稳定怎么办
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我在做肌红蛋白的原核表达，但是表达水平很低，但活性还可以。本来带有His标签，但是挂不上柱，用SP柱可以除去部分杂蛋白，但是透析的时候蛋白就会沉淀下来，离心后上清活性也是可以的，继续做稳定性时发现在4℃的稳定性很差，3周就降解的差不多没有了，但-20℃没问题是稳定的。 现在请假大家： 1.如何提高表达量，我是从温度、时间、IPTG浓度都试过了 2.如何提高稳定性，我的Buffer是20/25mM Tris pH7.5 1mM EDTA、0.02%叠氮钠 0.01%SDS 因为蛋白再透析时就产生沉淀，但上清仍有活性，我改变过他们的pH 和含氯化钠的量，最高加到100mM，但是透析还是有沉淀 |
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11楼2013-01-11 14:19:53
cicelyzh
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