24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

MolEPI: 2
应助: 24 (小学生)
金币: 251.2
散金: 1492
红花: 17
帖子: 1037
在线: 203.2小时
虫号: 933070
注册: 2009-12-25
性别: MM
专业: 认知心理学

[求助] 蛋白的表达量低不稳定怎么办

我在做肌红蛋白的原核表达，但是表达水平很低，但活性还可以。本来带有His标签，但是挂不上柱，用SP柱可以除去部分杂蛋白，但是透析的时候蛋白就会沉淀下来，离心后上清活性也是可以的，继续做稳定性时发现在4℃的稳定性很差，3周就降解的差不多没有了，但-20℃没问题是稳定的。
现在请假大家：
1.如何提高表达量，我是从温度、时间、IPTG浓度都试过了
2.如何提高稳定性，我的Buffer是20/25mM Tris pH7.5 1mM EDTA、0.02%叠氮钠 0.01%SDS

因为蛋白再透析时就产生沉淀，但上清仍有活性，我改变过他们的pH
和含氯化钠的量，最高加到100mM，但是透析还是有沉淀

回复此楼

» 猜你喜欢

可以朝九晚五，也能浪迹天涯

1楼 2013-01-06 14:13:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

MolEPI: 2
应助: 24 (小学生)
金币: 251.2
散金: 1492
红花: 17
帖子: 1037
在线: 203.2小时
虫号: 933070
注册: 2009-12-25
性别: MM
专业: 认知心理学

引用回帖:

10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-11 14:16:16
透析液是可以的。如果盐对你的酶活影响不大的话，可以在透析液里加上一些NaCl，比方说100mM。或者做分步透析，就是不要一步就上无盐的透析液，先只降一些，慢慢降下来。...

嗯，不过我有这样，纯化后蛋白的盐浓度是0.5M，我配透析液时用0.4M的都沉淀了
也不知道是为什么