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bluesun5198

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[求助] AFLP选扩弥散，无很明显主带

做基因组DNA, AFLP引物筛选，第一张图是预扩增琼脂糖检测结果，第一排是我的预扩产物（下面是帮人带的样）60V 1h， 1%的胶，没注意显色剂Gelred和胶的比例，故跑的不是很好。（酶切连接产物没有稀释直接做的预扩）

后面两张都是同一块选扩的胶，一个是正常曝光，另一个是过曝光的，由于点样孔漏了，故只有前两排孔比较完整。3%的胶，70V 50分钟捡的，感觉选扩的引物没有一个能用的，不想上聚丙酰胺凝胶了，想直接跑荧光了。（选扩引物是师姐留下的，时间有点久，溶液-20大概放了1年了，不知道还能用不）

求高人指点，是我选扩体系的问题，还是引物的问题，还是说我的预扩出问题了。可以直接上荧光不？关键荧光引物贵啊。求指点啊

dell 2012-12-27 13hr 55min52(2) LY6 L1 L2 L24 L25 H21 H20.jpg

dell 2012-12-31 14hr 09min选扩1.jpg

dell 2012-12-31 14hr 13min过曝光.jpg

[ Last edited by bluesun5198 on 2013-1-3 at 23:00 ]

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1楼 2013-01-03 22:50:10

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bluesun5198

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引用回帖:

12楼: Originally posted by zhangyonghu at 2013-03-05 19:28:52
我现在是一点进展也没有啊
欲扩在750那有一条明显的主带，向下弥散到200
选扩点样孔那特别黑，在往下有点弥散
我的引物是新稀释的
你能把你的步骤、体系和程序发到我的邮箱么：zhangyonghu0815@126.com 谢谢
...

我是比着一个纸质论文弄的，体系都差不多。酶切产物稀释5倍预扩，预扩稀释20选扩。你的预扩有明显主带，还是酶切的问题应该，可以把酶切时间加长。