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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 中药学 » 紫外测总黄酮含量，空白对照有问题
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lazymiaomi

新虫 (初入文坛)

[求助] 紫外测总黄酮含量，空白对照有问题

我是做中药材总黄酮含量测定（药材是用70％甲醇提的），用槲皮素做对照，在372nm下测（用的石英比色皿），之前是按照亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠的方法显色，然后用70％甲醇定容，空白除了没加药，剩下的都加了。放到仪器中，调零后，就发现，刚调零的数值就开始自己往上蹦，调零的速度都赶不上它蹦的速度。到底是为什么呢？如果是因为空白溶液不均匀的话，是因为室温很低，所以配的亚硝酸钠那三种试剂有析出吗？那三种显色剂配完能放多久呢？拜托各位指导一下我吧……真心抑郁呢……

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1楼 2013-01-03 22:12:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

33088605

铁虫 (正式写手)

general

【答案】应助回帖

★ ★
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karl2100: 金币+1, 谢谢回帖！ 2013-01-04 23:39:21
lazymiaomi: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢，但是楼主很穷。。。 2013-01-11 13:04:18
紫外检测所受的影响因素很多，样品中如果气泡过多也会出现这样的情况。不知道你地东西稳定不稳定，如果稳定性还可以的话,楼上所说的方法都不管用的话可以尝试将样品超声下。我们之前做过得一些样品是要超声除去里面的CO2的。
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伟大的人不需要个人签名
8楼2013-01-04 16:32:11
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lazymiaomi

新虫 (初入文坛)
那三样显色试剂可能是我没密封保存，我们实验室环境太差了，所以都变了，每次都重配后，空白就没有问题了。
药典说要放置15分钟，再测吸光度，可是数值下降超快，几秒钟就能下降0.01，正常吗？
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11楼2013-01-10 20:35:59
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ronzelau

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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xiaoxiao270: 金币+1 2013-01-04 10:50:24
lazymiaomi: 金币+2, ★★★很有帮助, 第一个回复我的人，谢谢你啦，但我是新来的，实在很穷，不好意思啊。。 2013-01-10 20:45:19
理论上不会出现空白增大的情况，建议重配主要试剂再试

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事在人为！
2楼2013-01-03 23:58:03
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2013-01-04 10:50:36
lazymiaomi: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢~楼主有点穷。。不好意思。。 2013-01-10 20:46:38
楼主，你的显色剂最好重配一下，因为我也做过相同的实验，基本上是没有任何问题的。还有三种显色剂配完可以放20分钟。
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5楼2013-01-04 10:00:08
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兔子少爷

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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xiaoxiao270: 金币+1 2013-01-06 19:46:53
lazymiaomi: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢，但是楼主很穷。。。 2013-01-11 13:04:35
之前是按照亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠的方法显色，具体的可以说一下，还有这些试剂放几天一般都没有问题的，只放空白试剂试试仪器的稳定性和精确性。
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9楼2013-01-06 14:53:46
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lazymiaomi

新虫 (初入文坛)
今天试剂都重配了，测的都很正常，可是如果每次都重配，真得好麻烦啊……看看明天再用那些试剂测一下，正不正常吧……

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10楼2013-01-08 15:27:28
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普通回帖

ronzelau

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xiaoxiao270: 金币+1 2013-01-06 19:47:01
理论上不会出现空白增大的情况，建议重配主要试剂再试

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事在人为！
3楼2013-01-03 23:58:27
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waterma

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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xiaoxiao270: 金币+1 2013-01-04 10:50:29
lazymiaomi: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢~楼主有点穷。。不好意思。。 2013-01-10 20:46:13
个人认为是显色剂未稳定造成，建议先以空比色皿为空白，测定空白试剂分别在1min,3min,5min等时间间隔的吸光度，测定显色剂稳定时间。
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4楼2013-01-04 08:35:25
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lazymiaomi

新虫 (初入文坛)
谢谢各位～我会重配试试的……这三种显色剂每次用都要重配吗？都能放多久呀？

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6楼2013-01-04 14:57:12
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accn

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2013-01-04 23:39:00
lazymiaomi: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢~楼主有点穷。。不好意思。。 2013-01-10 20:46:57
空白还是很稳定的，经常做，各个溶液配好后保存几个月都没问题，常温
样品倒是要注意，避光会稳定点
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7楼2013-01-04 15:51:12
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