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H-xiangzhu

金虫 (正式写手)

[求助] 急!PCR产物测序找不到引物 已有1人参与

我想做放线菌的16rDNA鉴定,先提取总DNA,PCR产物直接测序,引物采用细菌通用引物,大小在1500bp这样,但是测序结果发现找不到因为序列,请问我该怎么办呢?是什么问题呢?请高手帮忙。非常感谢!
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lihongbo840427

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by H-xiangzhu at 2013-01-05 16:48:18
恩呢,懂了,真是非常的感谢~我知道我应该做什么了,另外,还想替我同学请教你一个问题,他提取小型昆虫总DNA,可是测序回来后经常有套峰,他想请教怎么可以避免这样呢?...

测序出现套峰的原因是你送去测序的DNA(PCR产物)不纯,样品中含有不止一种DNA。不知道你同学送测序的是什么样品。送之前是否经过琼脂糖凝胶电泳检测,是否为单一条带呢?
要避免这种情况,主要从设计的引物的特异性着手,选择更特异的引物来PCR,得到的PCR产物经电泳检测是单一条带,再去测序看看。
希望能帮到你。
13楼2013-01-05 17:41:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测序结果在引物附近的分辨率非常低,给出的序列一般不包括引物,引物后面的十几个碱基也有可能缺失。
2楼2012-12-31 06:14:36
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lihongbo840427

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目前测序的可信区间在500bp左右,你的产物大小在1500bp。正反引物测序得到的序列的最后是相对的引物的反向互补序列。所以你的测序结果是不可能包含引物序列的。测得长度不够的。
3楼2012-12-31 11:34:09
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H-xiangzhu

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lihongbo840427 at 2012-12-31 11:34:09
目前测序的可信区间在500bp左右,你的产物大小在1500bp。正反引物测序得到的序列的最后是相对的引物的反向互补序列。所以你的测序结果是不可能包含引物序列的。测得长度不够的。

我是采用了双向测序,那请问我需要做什么呢、?可以达到目的
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4楼2013-01-02 22:03:18
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