24小时热门版块排行榜    

查看: 2595  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] pET31b双酶切为何只有一条带呀???

各位大侠好,最近我用pET31b空质粒做Nde1和Xho1双酶切,两酶之间大约有380 bp,但为何双酶切后看不到380 bp的条带呢??两种酶没有问题,已经验证过单酶切都能切开,双酶切也能切开,大小是对的,但就是没有切下来的小片段,这是为何呀???
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, 有帮助, 谢谢,可以试一下重新提质粒 2012-12-30 13:13:55
可以重新提取质粒再切一下试试。
我就遇到过,全合成的序列,直接拿合成公司给的质粒酶切,就是切不下来目的片段,后来用给的菌重提质粒,一下子就出来了。
原因应该是质粒浓度太低。
生物资源交流QQ群:1044518333
5楼2012-12-30 10:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
cdmmore: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢,这个建议很好,非常感谢! 2012-12-30 13:19:47
还有一种可能就是你的目的基因没有连接进载体,就是说仅仅是空载体,所以即使是单酶切还是双酶切,都能切开。
目的片段与载体连接后,建议同时做空载体连接对照。如果空连对照长得很少,说明目的基因正确连接的可能性就大。
如果没做空连对照,建议先做一下菌液PCR,能扩出来目的基因的那个克隆,再提质粒酶切鉴定、测序鉴定。
或者,你不想做PCR,你可以同时多挑取几个克隆,提质粒酶切鉴定。
总之,鉴定的方法很多。
生物资源交流QQ群:1044518333
6楼2012-12-30 11:12:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by cdmmore at 2012-12-30 13:04:42
酶切时间1小时,算长吗?...

看你用什么酶,如果快切酶,说明书说的是5分钟就够了。
普通的酶,我一般是37度3小时。
生物资源交流QQ群:1044518333
8楼2012-12-30 13:10:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cdmmore 的主题更新
信息提示
请填处理意见