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cdmmore

铜虫 (小有名气)

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[求助] pET31b双酶切为何只有一条带呀？？？

各位大侠好，最近我用pET31b空质粒做Nde1和Xho1双酶切，两酶之间大约有380 bp，但为何双酶切后看不到380 bp的条带呢？？两种酶没有问题，已经验证过单酶切都能切开，双酶切也能切开，大小是对的，但就是没有切下来的小片段，这是为何呀？？？

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1楼 2012-12-29 22:02:40

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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
cdmmore: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢，这个建议很好，非常感谢！ 2012-12-30 13:19:47

还有一种可能就是你的目的基因没有连接进载体，就是说仅仅是空载体，所以即使是单酶切还是双酶切，都能切开。
目的片段与载体连接后，建议同时做空载体连接对照。如果空连对照长得很少，说明目的基因正确连接的可能性就大。
如果没做空连对照，建议先做一下菌液PCR，能扩出来目的基因的那个克隆，再提质粒酶切鉴定、测序鉴定。
或者，你不想做PCR，你可以同时多挑取几个克隆，提质粒酶切鉴定。
总之，鉴定的方法很多。