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RX_豆丁

铁虫 (正式写手)

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[求助] 【lowry测酶活性，怎么确定光波长和做标准曲线】求问大神

本人本科生，实验能力灰常一般，想求助各位，越详细越好，刚注册也木有多少金币可以给……希望能得到好心人帮助，谢谢啦~
我们做的是测定某虫子身体中不同情况下 5 种酶中，哪种酶占主导。看了一些文献，都是用分光光度计来测酶活性和含量。但是不知道怎么确定哪种酶用哪种波长来测定。还有标准牛血清蛋白配比的浓度和测定牛血清的波长怎么确定呢？
看了一些文献，都没有详细的写出这些实验步骤要求，比较纠结，有点头大~~

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考上研究生的都是神

1楼 2012-12-29 21:51:35

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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

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专业: 生物物理、生物化学与分子

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
RX_豆丁: 金币+1, ★有帮助 2012-12-31 10:00:54

lowry法测不了活性，只能测蛋白浓度。
它是蛋白浓度测定的通用方法，所以区分不出你的样品中哪种蛋白占主导，测定的是你样品中所有蛋白的含量。
你想知道你样品中几种蛋白的比例，那么你可以分别纯化出来，然后分别测定其含量，当然纯化过程或有损失；要不你知道其中的各种主要酶的比活也可以，通过测定样品中其活性，计算出各自的蛋白浓度。
至于检测波长，现在改良法为650nm，而这个是蛋白复合物的吸收峰波长，不论你是蛋白a，还是蛋白b，还是牛血清白蛋白；有对照品做标准曲线，这个波长差点也无所谓。
标准曲线的范围和测定方法，在网上搜搜。