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无形居士2009

金虫 (正式写手)

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[求助] 如何充分形成发卡结构

想把DNA单链通过退火使发卡结构形成，可是跑胶后发现有一部分二聚体的形成~~急求各位大侠们，如何使它形成发卡结构，同时避免二聚体的行程呢？退火温度怎么控制？？有经验的同学们分享一下吧~

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1楼 2012-12-27 09:35:50

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无形居士2009

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引用回帖:

5楼: Originally posted by wen1023tao at 2012-12-27 12:27:09
可以再PCR仪上95度10min，然后缓慢降温到退火温度，65度左右，立即拿出来在室温自然缓慢冷却30min，然后做连接
这个是我当时构建RNAi时用的体系，可以试试，希望有所帮助，还有就是要死引物序列不好，形成二聚体是 ...

我购买的DNA链同过IDT软件模拟可以形成发卡结构我在用来杂交之前先在金属浴中90℃退火5min 保证该发卡结构的形成然后在加入到溶液中去，实验室没有做PCR 也没有PCR仪我只是单纯的想要发卡结构不想要二聚体可是它形成了呀