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无形居士2009

金虫 (正式写手)

[求助] 如何充分形成发卡结构

想把DNA单链通过退火使发卡结构形成,可是跑胶后发现有一部分二聚体的形成~~急求各位大侠们,如何使它形成发卡结构,同时避免二聚体的行程呢?退火温度怎么控制??有经验的同学们分享一下吧~
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无形居士2009

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hongfan at 2012-12-27 09:49:16
PCR快速升温至90摄氏度,保持5min,再缓慢降温,每降5度,停2-3分钟

我不是做pcr的  我就是退货形成发卡结构 不想要二聚体呀 有什么建议么
3楼2012-12-27 09:51:39
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hongfan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
无形居士2009: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-27 10:27:51
PCR快速升温至90摄氏度,保持5min,再缓慢降温,每降5度,停2-3分钟
123
2楼2012-12-27 09:49:16
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hongfan

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 无形居士2009 at 2012-12-27 09:51:39
我不是做pcr的  我就是退货形成发卡结构 不想要二聚体呀 有什么建议么...

不是PCR,而是用PCR仪去做啊,不用PCR怎么annealing呢,
123
4楼2012-12-27 11:56:55
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wen1023tao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
无形居士2009: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-27 14:05:09
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-27 16:57:45
可以再PCR仪上95度10min,然后缓慢降温到退火温度,65度左右 ,立即拿出来在室温自然缓慢冷却30min,然后做连接
这个是我当时构建RNAi时用的体系,可以试试,希望有所帮助,还有就是要死引物序列不好,形成二聚体是不可避免的
5楼2012-12-27 12:27:09
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