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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何充分形成发卡结构
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无形居士2009

金虫 (正式写手)

[求助] 如何充分形成发卡结构

想把DNA单链通过退火使发卡结构形成，可是跑胶后发现有一部分二聚体的形成~~急求各位大侠们，如何使它形成发卡结构，同时避免二聚体的行程呢？退火温度怎么控制？？有经验的同学们分享一下吧~
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1楼 2012-12-27 09:35:50
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wen1023tao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
无形居士2009: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-27 14:05:09
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-27 16:57:45
可以再PCR仪上95度10min，然后缓慢降温到退火温度，65度左右 ，立即拿出来在室温自然缓慢冷却30min，然后做连接
这个是我当时构建RNAi时用的体系，可以试试，希望有所帮助，还有就是要死引物序列不好，形成二聚体是不可避免的
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5楼2012-12-27 12:27:09
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hongfan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
无形居士2009: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-27 10:27:51
PCR快速升温至90摄氏度，保持5min，再缓慢降温，每降5度，停2-3分钟
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123
2楼2012-12-27 09:49:16
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无形居士2009

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hongfan at 2012-12-27 09:49:16
PCR快速升温至90摄氏度，保持5min，再缓慢降温，每降5度，停2-3分钟

我不是做pcr的  我就是退货形成发卡结构 不想要二聚体呀 有什么建议么
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3楼2012-12-27 09:51:39
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hongfan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 无形居士2009 at 2012-12-27 09:51:39
我不是做pcr的  我就是退货形成发卡结构 不想要二聚体呀 有什么建议么...

不是PCR，而是用PCR仪去做啊，不用PCR怎么annealing呢，
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123
4楼2012-12-27 11:56:55
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