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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒双酶切
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寒冰利剑

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒双酶切

实验室有一个改造过的质粒，两个酶切位点之间只有10bp，请问各位高手，怎么做双酶切啊。有没有类似经历。
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岂能尽如人意，但求无愧我心。
1楼 2012-12-20 13:28:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by xy656691 at 2012-12-22 13:00:25
那这两三个碱基是在酶切位点两端各加两三个碱基，还是只在酶切位点的一端加两三个碱基？如果是只在一端加，那么加在哪边？...

保护碱基是加在酶切位点的5'端的，3'端是正常的引物序列。
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13楼2012-12-23 00:25:33
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按正常方法酶切就行，我以前还做过两个酶切位点连在一起的双酶切，也能切开。
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2楼2012-12-20 14:03:43
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
这个间距还小啊，哪个质粒的MCS中的酶切位点都很少有10bp这么大的间距的。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-12-20 14:12:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10bp的距离一般不受末端效应的影响了。如果共用buffer，直接双酶切。
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4楼2012-12-20 14:27:43
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