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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒双酶切
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寒冰利剑

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒双酶切

实验室有一个改造过的质粒，两个酶切位点之间只有10bp，请问各位高手，怎么做双酶切啊。有没有类似经历。
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岂能尽如人意，但求无愧我心。
1楼 2012-12-20 13:28:56
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按正常方法酶切就行，我以前还做过两个酶切位点连在一起的双酶切，也能切开。
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2楼2012-12-20 14:03:43
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
这个间距还小啊，哪个质粒的MCS中的酶切位点都很少有10bp这么大的间距的。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-12-20 14:12:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10bp的距离一般不受末端效应的影响了。如果共用buffer，直接双酶切。
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4楼2012-12-20 14:27:43
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寒冰利剑

金虫 (小有名气)
多谢各位高手的回复。
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岂能尽如人意，但求无愧我心。
5楼2012-12-21 18:44:48
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二狗儿

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
选一个10bp内部的酶切位点 再选一个外部的
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风雨彩虹铿锵玫瑰
6楼2012-12-21 19:52:21
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
it is very easy to digest the vector by enzymes
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7楼2012-12-22 04:06:18
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xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-20 14:27:43
10bp的距离一般不受末端效应的影响了。如果共用buffer，直接双酶切。

啥叫末端效应？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2012-12-22 08:17:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by xy656691 at 2012-12-22 08:17:34
啥叫末端效应？
...

就是说酶切位点在一个片段的末端的话酶的切割效率会下降。如果两个酶切位点很近，一个切开后，另一个酶再去识别的时候位点就在末端了，可能会影响切割效率。所以说，如果设计引物上带酶切位点的话需要加保护碱基。
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9楼2012-12-22 08:21:41
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xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-22 08:21:41
就是说酶切位点在一个片段的末端的话酶的切割效率会下降。如果两个酶切位点很近，一个切开后，另一个酶再去识别的时候位点就在末端了，可能会影响切割效率。所以说，如果设计引物上带酶切位点的话需要加保护碱基。...

恩恩；那引物设计时加的保护碱基也就最多的不超过5个吧，这样就可以避免末端效应了吗？
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10楼2012-12-22 09:54:34
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