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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家是不是都有蛋白膠粘的上不去樣的時候啊，腫麼辦？？
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 大家是不是都有蛋白膠粘的上不去樣的時候啊，腫麼辦？？

直接用細胞或者細菌裂解液直接跑蛋白膠總那麼粘啊？上不進去樣。。。大家有什麽辦法改善嗎還不影響樣品質量的？？？
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1楼 2012-12-17 12:27:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你的样品浓度太高了，如果稀释度合适的话不会出现这个问题。此外如果是样品中主要是膜蛋白且浓度较高时，不适合高温加热。
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loveskyzhou
2楼2012-12-17 13:18:45
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
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3楼2012-12-17 17:11:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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3?: Originally posted by loveskyzhou at 2012-12-17 17:11:36
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5楼2012-12-18 07:29:07
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
DNA酶消化试试
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6楼2012-12-18 09:22:24
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-17 13:18:45
你的样品浓度太高了，如果稀释度合适的话不会出现这个问题。此外如果是样品中主要是膜蛋白且浓度较高时，不适合高温加热。

我發現樣品室溫放了2天以後自然就好上樣了。。。。不過這樣會不會蛋白降解了呢？
我在樣品里加了loading buffer 和 1%的DDM（去垢劑），網上說還要加蛋白酶抑製劑，可是加了loading buffer以後蛋白酶自身不也失活了嗎？
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7楼2012-12-19 16:40:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
loveskyzhou: 金币+2, 謝謝 2012-12-20 09:53:23
引用回帖:
7楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-12-19 16:40:15
我發現樣品室溫放了2天以後自然就好上樣了。。。。不過這樣會不會蛋白降解了呢？
我在樣品里加了loading buffer 和 1%的DDM（去垢劑），網上說還要加蛋白酶抑製劑，可是加了loading buffer以後蛋白酶自身不也失活 ...

没有试过把粘的样品放置再看的。不过我想应该不是蛋白降解了，因为有loading buffer，蛋白酶应该不起作用的。
你如果做的是变性胶的话当然不用加什么蛋白酶抑制剂。loading buffer里面的SDS会使酶变性失活的。如果你做native PAGE的话，蛋白样品是非变性条件下当然需要蛋白酶抑制剂。
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8楼2012-12-20 08:40:46
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yingying15884楼
2012-12-17 19:04   回复  
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
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