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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 果蔬 » 求指导 叶绿素含量测定
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朱古力言小肥

铜虫 (小有名气)

[求助] 求指导 叶绿素含量测定 已有1人参与

①取新鲜菠菜叶片，擦干净组织表面的污染物，剪成碎块，称取 1 g，加 5 mL 纯丙酮及少量石英砂和碳酸钙于研钵中研磨，再加 80%丙酮洗涤过滤，定容至20 mL。
②取提取液 1 mL 加 4 mL 80%丙酮， 用 80%丙酮为对照，直接用分光光度计测定 663 和 645 处的 OD 值，测量时数据可直接在分光光度计中读取。
③将上述 OD 值代入计算叶绿素浓度的公式中：Ca=12.7OD663-2.69OD645；Cb =22.9OD645-4.68OD663；Ct =Ca +Cb =8.02OD663+20.21OD645。
④叶绿素含量（mg/g）=（叶绿素浓度×提取液总体积×稀释倍数）/样品鲜重
如上，这个提取液总体积指的是最后的总体积20mL吗？稀释倍数怎么算？求指导
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加油！
1楼 2012-12-16 20:38:07
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张辉angel

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
朱古力言小肥: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-20 08:50:30
此处提取液总体积是指20mL，稀释倍数为5倍，但楼主要注意你的公式有一点问题，应该再除以1000，即叶绿素含量（mg/g）=（叶绿素浓度×提取液总体积×稀释倍数）/（样品鲜重x1000），这样叶绿素含量的单位才是mg/g,因为这里Ct的单位是mg/L。这个问题有些书籍没有说清楚，导致我一开始做的时候与相关文献上的数据差距很大。还有楼主你的公式（Ca=12.7OD663-2.69OD645；Cb =22.9OD645-4.68OD663；Ct =Ca +Cb =8.02OD663+20.21OD645）不知从哪个资料查到的。与我查到的资料有点不同，就是系数上的微小区别，我先把我查到的公式说一下，你可以参考一下，希望对你有帮助：Ca=12.72OD663-2.59OD645；Cb =22.88OD645-4.67OD663；Ct =Ca +Cb =8.05OD663+20.29OD645。差别不是很大，但精确性应该不一样。
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3楼2012-12-19 09:05:24
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1856029357

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
朱古力言小肥: 金币+2 2012-12-19 08:15:36
总体积是20，只稀释了一次就是取1ml加4ml丙酮，因此稀释倍数就是5倍了。
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乱世出英雄，盛世皆狗熊
2楼2012-12-18 22:46:36
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叶落午夜香

铜虫 (小有名气)
这个楼还有人吗？我想问下，第一步结束后得到丙酮叶绿素液后，在做吸光度吸收前需要做什么，需要放到摇床摇吗？需要摇多久？谢谢，我们实验室有几个人现在在谈论这个，有人说要放12个小时才可以测
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加油吧
5楼2014-08-11 16:58:16
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laowu1062000

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

5min就可以啊，确定你研磨提取的叶片最后变白了就可以，就说明叶绿素全部提取了
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多向大家学习
6楼2014-08-17 10:41:30
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