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vpz2007

木虫 (小有名气)

[求助] 求指点用IPTG诱连接在pET28a上的蛋白表达

各位战友,大家好!最近我用IPTG诱导蛋白表达,诱导浓度是0.2mM,0.4mM,0.6mM,0.8mM,分别在28和37度诱导。但是每次都没有在跑电泳时看到有条带了。BL21大肠杆菌中,连接在pET28a上的蛋白是一个自己合成的只有300bp,大约11kD的小蛋白,我现在已经被这个问题弄得焦头烂额了,希望有经验的战友能够提供一点意见,非常感谢!
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可以接受失败,但不能失去再次站起来的勇气
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定序列对不对,哪怕序列是你当初设定的序列,也要细心检查构建载体的时候有没有移码或什么的,确定你的设计没有任何问题,蛋白才能表达出来。
如果能表达的话,条件不是很好也能诱导的,只是浓度的问题。先从源头看看。
蛋白表达不好弄,试过哪怕什么都可以的,都做不出来。
载体上不是有His吗?看看跑胶后有没有His的条带,这样才能确定你用的载体或试剂有没有问题。
你的日子如何,你的力量也必如何!
9楼2012-12-12 14:33:51
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