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daisyhappy铜虫 (小有名气)
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QPCR模板RNA逆转录为CDNA后，CT值过大
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请教大家一个问题，由于试剂盒中的标准品是RNA，但是这个不好保存太不稳定易降解，所以我现在讲其全部一次性逆转录成CDNA，想用这个作为标准品进行定量。但是将CDNA进行梯度稀释以后，发现CT值偏大，一般在28以后，最大的到38，根本无法准确定量。电泳检测还是有产物的。想请问大家： 1.有没有好的方法解决这种标准品是RNA的问题？或者溶在乙醇里面保存？ 2.我开始做的几次QPCR复孔重复性挺好的，但是现在做总是重复性不好。不知道哪里出了问题？我用的试剂等分别是一个厂家的，但是不同的试剂盒。 请大家帮忙分析，谢谢！ |
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