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ss2165

铜虫 (初入文坛)

[求助] 天然产物的纯化

准备开始用sephadex LH-20纯化我柱层析出的样品,样品量约0.3-0.5g吧,但本人从未接触过此类凝胶柱,求教有经验的大侠们有关样品与凝胶量的关系,我这个情况得需要多少量的填料,装多高的柱子。现在老师已经同意买sephadex LH-20填料了,但是得有个具体的量。希望有经验朋友们多多给予指导。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

0.3-.5g的样品用凝胶过滤?吓死我了,或许生物材料不同吧,如果是蛋白质,算过柱一次要1小时,得连续一星期一秒都不能睡觉。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2012-12-06 23:14:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
10楼: Originally posted by 王迷霞 at 2014-12-14 14:00:23
那你都上样量多少呢?还是流速特别慢?...

凝胶过滤是靠分子量差异来分离蛋白质的,如果目的蛋白质与杂质蛋白质的分子量差别很小就不能用。而且凝胶过滤的样品体积最好别大于柱床体积的2%,因为样品体积太大会降低分离效果。流速肯定也不能快的,我用过一个柱,过一次就得2小时,假如加上用水置换保存液、平衡、洗脱、用水置换洗脱液、用保存液置换水,就是20小时,如果用纯化仪来控制就能睡觉,手工做就很麻烦了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
11楼2014-12-14 15:42:35
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