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汕头大学海洋科学接受调剂
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ss2165

铜虫 (初入文坛)

[求助] 天然产物的纯化

准备开始用sephadex LH-20纯化我柱层析出的样品,样品量约0.3-0.5g吧,但本人从未接触过此类凝胶柱,求教有经验的大侠们有关样品与凝胶量的关系,我这个情况得需要多少量的填料,装多高的柱子。现在老师已经同意买sephadex LH-20填料了,但是得有个具体的量。希望有经验朋友们多多给予指导。
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专家顾问 (知名作家)

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引用回帖:
10楼: Originally posted by 王迷霞 at 2014-12-14 14:00:23
那你都上样量多少呢?还是流速特别慢?...

凝胶过滤是靠分子量差异来分离蛋白质的,如果目的蛋白质与杂质蛋白质的分子量差别很小就不能用。而且凝胶过滤的样品体积最好别大于柱床体积的2%,因为样品体积太大会降低分离效果。流速肯定也不能快的,我用过一个柱,过一次就得2小时,假如加上用水置换保存液、平衡、洗脱、用水置换洗脱液、用保存液置换水,就是20小时,如果用纯化仪来控制就能睡觉,手工做就很麻烦了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
11楼2014-12-14 15:42:35
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查看全部 13 个回答

ss2165

铜虫 (初入文坛)

再追问一个问题:sephadex LH-20分离的话,是不是柱高径比越大越好啊,我们实验室有一个内径为1cm,高30cm的柱子,为了节省填料,计划用这个柱子,不知道可行呢?
2楼2012-12-03 17:23:10
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张飞zfw

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-03 22:20:58
0.3-.5g的样品,这个量比较少,用你提到的柱子是可以的,sephadex LH-20溶胀后占总体积的75%,用你那个柱子估计10克sephadex LH-20就够了,我用2cm*30cm的柱子就用了20g填料,不过我用的250ml的球形柱,洗脱剂有的装,不知您的是啥柱子

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

不断溜走的机会不要遗憾,继续蓄势,终会待发,我命由我,不由天!
3楼2012-12-03 21:54:04
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ss2165

铜虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张飞zfw at 2012-12-03 21:54:04
0.3-.5g的样品,这个量比较少,用你提到的柱子是可以的,sephadex LH-20溶胀后占总体积的75%,用你那个柱子估计10克sephadex LH-20就够了,我用2cm*30cm的柱子就用了20g填料,不过我用的250ml的球形柱,洗脱剂有的装 ...

我用就的就是普通的柱层析用的柱子,准备用甲醇溶胀,二氯甲烷或乙酸乙酯与甲醇混合洗脱,不知你说的75%是用什么溶胀的呢?
4楼2012-12-04 08:29:51
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