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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 天然产物的纯化
汕头大学海洋科学接受调剂
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ss2165

铜虫 (初入文坛)

[求助] 天然产物的纯化

准备开始用sephadex LH-20纯化我柱层析出的样品，样品量约0.3-0.5g吧，但本人从未接触过此类凝胶柱，求教有经验的大侠们有关样品与凝胶量的关系，我这个情况得需要多少量的填料，装多高的柱子。现在老师已经同意买sephadex LH-20填料了，但是得有个具体的量。希望有经验朋友们多多给予指导。
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1楼 2012-12-03 17:14:21
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
10楼: Originally posted by 王迷霞 at 2014-12-14 14:00:23
那你都上样量多少呢？还是流速特别慢？...

凝胶过滤是靠分子量差异来分离蛋白质的，如果目的蛋白质与杂质蛋白质的分子量差别很小就不能用。而且凝胶过滤的样品体积最好别大于柱床体积的2%，因为样品体积太大会降低分离效果。流速肯定也不能快的，我用过一个柱，过一次就得2小时，假如加上用水置换保存液、平衡、洗脱、用水置换洗脱液、用保存液置换水，就是20小时，如果用纯化仪来控制就能睡觉，手工做就很麻烦了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
11楼2014-12-14 15:42:35
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ss2165

铜虫 (初入文坛)
再追问一个问题：sephadex LH-20分离的话，是不是柱高径比越大越好啊，我们实验室有一个内径为1cm，高30cm的柱子，为了节省填料，计划用这个柱子，不知道可行呢？
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2楼2012-12-03 17:23:10
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张飞zfw

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-03 22:20:58
0.3-.5g的样品，这个量比较少，用你提到的柱子是可以的，sephadex LH-20溶胀后占总体积的75%，用你那个柱子估计10克sephadex LH-20就够了，我用2cm*30cm的柱子就用了20g填料，不过我用的250ml的球形柱，洗脱剂有的装，不知您的是啥柱子
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

ss2165
不断溜走的机会不要遗憾，继续蓄势，终会待发，我命由我，不由天！
3楼2012-12-03 21:54:04
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ss2165

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张飞zfw at 2012-12-03 21:54:04
0.3-.5g的样品，这个量比较少，用你提到的柱子是可以的，sephadex LH-20溶胀后占总体积的75%，用你那个柱子估计10克sephadex LH-20就够了，我用2cm*30cm的柱子就用了20g填料，不过我用的250ml的球形柱，洗脱剂有的装 ...

我用就的就是普通的柱层析用的柱子,准备用甲醇溶胀,二氯甲烷或乙酸乙酯与甲醇混合洗脱,不知你说的75%是用什么溶胀的呢？
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4楼2012-12-04 08:29:51
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