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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 天然产物的纯化
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ss2165

铜虫 (初入文坛)

[求助] 天然产物的纯化

准备开始用sephadex LH-20纯化我柱层析出的样品，样品量约0.3-0.5g吧，但本人从未接触过此类凝胶柱，求教有经验的大侠们有关样品与凝胶量的关系，我这个情况得需要多少量的填料，装多高的柱子。现在老师已经同意买sephadex LH-20填料了，但是得有个具体的量。希望有经验朋友们多多给予指导。
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1楼 2012-12-03 17:14:21
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ss2165

铜虫 (初入文坛)
再追问一个问题：sephadex LH-20分离的话，是不是柱高径比越大越好啊，我们实验室有一个内径为1cm，高30cm的柱子，为了节省填料，计划用这个柱子，不知道可行呢？
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2楼2012-12-03 17:23:10
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张飞zfw

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-03 22:20:58
0.3-.5g的样品，这个量比较少，用你提到的柱子是可以的，sephadex LH-20溶胀后占总体积的75%，用你那个柱子估计10克sephadex LH-20就够了，我用2cm*30cm的柱子就用了20g填料，不过我用的250ml的球形柱，洗脱剂有的装，不知您的是啥柱子
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ss2165
不断溜走的机会不要遗憾，继续蓄势，终会待发，我命由我，不由天！
3楼2012-12-03 21:54:04
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ss2165

铜虫 (初入文坛)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 张飞zfw at 2012-12-03 21:54:04
0.3-.5g的样品，这个量比较少，用你提到的柱子是可以的，sephadex LH-20溶胀后占总体积的75%，用你那个柱子估计10克sephadex LH-20就够了，我用2cm*30cm的柱子就用了20g填料，不过我用的250ml的球形柱，洗脱剂有的装 ...

我用就的就是普通的柱层析用的柱子,准备用甲醇溶胀,二氯甲烷或乙酸乙酯与甲醇混合洗脱,不知你说的75%是用什么溶胀的呢？
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4楼2012-12-04 08:29:51
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张飞zfw

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
ss2165: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-07 14:54:04
75%用的是甲醇溶胀，最少要溶胀4个小时，二氯甲烷或乙酸乙酯与甲醇混合洗脱,这用的是正相溶剂，您分离的东西估计极性很小吧，如果用甲醇溶胀的话，洗脱前建议先用洗脱剂平衡柱子。
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ss2165
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5楼2012-12-06 20:56:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

0.3-.5g的样品用凝胶过滤？吓死我了，或许生物材料不同吧，如果是蛋白质，算过柱一次要1小时，得连续一星期一秒都不能睡觉。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2012-12-06 23:14:26
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ss2165

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 张飞zfw at 2012-12-06 20:56:59
75%用的是甲醇溶胀，最少要溶胀4个小时，二氯甲烷或乙酸乙酯与甲醇混合洗脱,这用的是正相溶剂，您分离的东西估计极性很小吧，如果用甲醇溶胀的话，洗脱前建议先用洗脱剂平衡柱子。

真心感谢.还是学得了东西.
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7楼2012-12-07 14:54:39
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ss2165

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 张飞zfw at 2012-12-06 20:56:59
75%用的是甲醇溶胀，最少要溶胀4个小时，二氯甲烷或乙酸乙酯与甲醇混合洗脱,这用的是正相溶剂，您分离的东西估计极性很小吧，如果用甲醇溶胀的话，洗脱前建议先用洗脱剂平衡柱子。

再请教一个问题,你用的75%甲醇是不是甲醇与水的比例啊.我的东西是可以溶于氯仿、乙酸乙酯，甲醇也是可以溶的，我打算的是用二氯甲烷/甲醇洗的，但是看好多人都是用甲醇洗，我又纠结了。第一次做这个，真的好迷茫啊。
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8楼2012-12-07 15:23:16
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张飞zfw

铜虫 (初入文坛)
75%是用甲醇溶胀凝胶后凝胶的体积，阁下在做凝胶层析前建议先做个TLC,根据样品的Rf值（Rf值在0.2-0.3之间最好）来确定洗脱剂的比例，切不可想当然选择，sephadex LH-20虽然纯化效果好，但如果洗脱剂选择不当就没效果了，建议你先用二氯甲烷/甲醇的不同比例洗脱，逐渐增大甲醇比例，最后再用甲醇洗脱，这是一般的洗脱原则——溶剂极性由小到大，希望对你有帮助。
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9楼2012-12-10 16:26:35
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匿名

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10楼2014-12-14 14:00:23
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