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ss2165

铜虫 (初入文坛)

[求助] 天然产物的纯化

准备开始用sephadex LH-20纯化我柱层析出的样品,样品量约0.3-0.5g吧,但本人从未接触过此类凝胶柱,求教有经验的大侠们有关样品与凝胶量的关系,我这个情况得需要多少量的填料,装多高的柱子。现在老师已经同意买sephadex LH-20填料了,但是得有个具体的量。希望有经验朋友们多多给予指导。
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张飞zfw

铜虫 (初入文坛)

75%是用甲醇溶胀凝胶后凝胶的体积,阁下在做凝胶层析前建议先做个TLC,根据样品的Rf值(Rf值在0.2-0.3之间最好)来确定洗脱剂的比例,切不可想当然选择,sephadex LH-20虽然纯化效果好,但如果洗脱剂选择不当就没效果了,建议你先用二氯甲烷/甲醇的不同比例洗脱,逐渐增大甲醇比例,最后再用甲醇洗脱,这是一般的洗脱原则——溶剂极性由小到大,希望对你有帮助。
不断溜走的机会不要遗憾,继续蓄势,终会待发,我命由我,不由天!
9楼2012-12-10 16:26:35
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ss2165

铜虫 (初入文坛)

再追问一个问题:sephadex LH-20分离的话,是不是柱高径比越大越好啊,我们实验室有一个内径为1cm,高30cm的柱子,为了节省填料,计划用这个柱子,不知道可行呢?
2楼2012-12-03 17:23:10
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张飞zfw

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-03 22:20:58
0.3-.5g的样品,这个量比较少,用你提到的柱子是可以的,sephadex LH-20溶胀后占总体积的75%,用你那个柱子估计10克sephadex LH-20就够了,我用2cm*30cm的柱子就用了20g填料,不过我用的250ml的球形柱,洗脱剂有的装,不知您的是啥柱子

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

不断溜走的机会不要遗憾,继续蓄势,终会待发,我命由我,不由天!
3楼2012-12-03 21:54:04
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ss2165

铜虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张飞zfw at 2012-12-03 21:54:04
0.3-.5g的样品,这个量比较少,用你提到的柱子是可以的,sephadex LH-20溶胀后占总体积的75%,用你那个柱子估计10克sephadex LH-20就够了,我用2cm*30cm的柱子就用了20g填料,不过我用的250ml的球形柱,洗脱剂有的装 ...

我用就的就是普通的柱层析用的柱子,准备用甲醇溶胀,二氯甲烷或乙酸乙酯与甲醇混合洗脱,不知你说的75%是用什么溶胀的呢?
4楼2012-12-04 08:29:51
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