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简单HE认真

木虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1706.2
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帖子: 74
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虫号: 1905190
注册: 2012-07-22
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 镍柱纯化中再生后柱子变白，什么问题？

各位虫友，最近小的在做蛋白纯化实验中，新柱子用完一遍后，冲洗2MNaCl（pH5.5）5-10ml，PBS（pH8.0）10ml，之后柱子基本上就变白啦，然后就不怎么挂蛋白啦，这样就不能重复利用啦，不知道是什么问题，有没有可能是试剂或者pH什么的出了问题，上样缓冲液是8M尿素，请各位帮忙解答（有什么我没说清楚的还可以要求再补充），谢谢！

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简单做人，认真做事。

1楼 2012-11-30 19:26:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

爱音乐之

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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红花: 2
帖子: 27
在线: 15.2小时
虫号: 2156370
注册: 2012-11-29

引用回帖:

15楼: Originally posted by qusongyuan at 2012-12-03 12:49:37
用EDTA确实可以将镍柱洗掉，很少即可。你的溶液中8M尿素及tris·cl，磷酸盐缓冲液没有问题的话，是不会洗掉Ni2+的。另外SDS似乎是不能洗掉Ni2+的，这点需要证实，本人做过似乎没事。可能你用的是TE缓冲液，TE里面的 ...

请问，我如果镍柱重生时用EDTA过夜了，第二天才用的水进行洗，会影响其结合力吗？？