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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 通过梯度PCR摸索的最佳退火温度，扩出来的条带不太亮，帮忙分析那些引物不可以用
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yangmindk

银虫 (初入文坛)

[求助] 通过梯度PCR摸索的最佳退火温度，扩出来的条带不太亮，帮忙分析那些引物不可以用

我是做SSR的，通过对30对引物进行梯度PCR，确定最佳退火温度，但是扩出来的条带依然不清晰，有的还是多条，不知道是非特异性扩增还是不同重复数的片段。用的是4%的琼脂糖凝胶，Marker是20bp，很郁闷啊，还请大家多多指教。

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明天会更好
1楼 2012-11-23 16:37:26
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yangmindk

银虫 (初入文坛)
怎么没回应呢？郁闷啊
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明天会更好
2楼2012-11-24 18:40:33
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saintoy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你换聚丙烯胶跑跑看，这个也太模糊了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yangmindk
saintoy@163.com
3楼2012-12-03 10:38:08
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yangmindk

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by saintoy at 2012-12-03 10:38:08
你换聚丙烯胶跑跑看，这个也太模糊了

嗯，这是PAGE胶跑的图片，12%的胶。帮忙看一下，谢谢哈.这是绵羊的

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明天会更好
4楼2012-12-03 12:21:20
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

梯度PCR只是在不知道具体退货温度的时候拿来找个大概的温度范围，在确定大概的温度范围之后需要再精确的做单独温度，最终找到一个温度最高（特异性好），产量最高（最适温度）的温度点再来跑PCR，否则你这个没有办法得到很准确的结果，垂直板不就跑成那个样子了嘛。
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5楼2012-12-03 16:45:54
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hyc_charles

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个是变性胶嘛？你这个PAGE胶跑的挺好的啊，垂直板跑出来这种的算是比较清楚的了。最下端的那部分不清楚，可以不用管它了。你是做什么，多态性分析么？
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不但要做一个优秀的人，更要做一个无可取代的人…
6楼2013-07-22 18:55:03
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