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bluesheart

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 58.6
帖子: 6
在线: 6小时
虫号: 2028333
注册: 2012-09-25
专业: 色谱分析

[求助] HPLC紫外分析多肽样品的问题

我在用HPLC做两个多肽样品的分离尝试
多肽样品的序列没有信息，只知道其中一个含有半胱氨酸，分子量1451.78。另一个2386.05
现在遇到的问题是：
1、多肽样品不好溶解，只能用高比例DMSO才能溶，但是流动相现在用的是乙腈/水。害怕样品进了柱子一稀释会析出来。有没有比较好进行多肽溶解尝试的方法。
2、检测上的问题。用紫外串蒸发光，峰有点对不上。一般分析多肽样品时紫外用多大的波长？

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1楼 2012-11-23 09:20:53

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小菜亦蝶

金虫 (小有名气)

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虫号: 1031471
注册: 2010-05-29
专业: 污染控制化学

你的分子量一个1千多的可能是十几肽左右，两千多的估计二十多肽吧，半胱氨酸没特征吸收峰吧，多肽特征吸收一般都是酰胺键的214nm或220nm检测，如果含芳香环就用275nm或280nm,可以先用紫外扫一下最大吸收是多少，然后用液相的时候就用这个吸收值，你说样品不好溶解，可能你的序列含疏水氨基酸比较多，先取一点点用双蒸水溶解，我的好多样品也不溶解，但多多少少水里会溶解一部分的，就取上清液做液相，不是非得全都溶解才行，DMSO加多了不好吧。我也是新手，仅供参考。