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汕头大学海洋科学接受调剂
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bluesheart

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC紫外分析多肽样品的问题

我在用HPLC做两个多肽样品的分离尝试
多肽样品的序列没有信息,只知道其中一个含有半胱氨酸,分子量1451.78。另一个2386.05
现在遇到的问题是:
1、多肽样品不好溶解,只能用高比例DMSO才能溶,但是流动相现在用的是乙腈/水。害怕样品进了柱子一稀释会析出来。有没有比较好进行多肽溶解尝试的方法。
2、检测上的问题。用紫外串蒸发光,峰有点对不上。一般分析多肽样品时紫外用多大的波长?
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小菜亦蝶

金虫 (小有名气)

你的分子量一个1千多的可能是十几肽左右,两千多的估计二十多肽吧,半胱氨酸没特征吸收峰吧,多肽特征吸收一般都是酰胺键的214nm或220nm检测,如果含芳香环就用275nm或280nm,可以先用紫外扫一下最大吸收是多少,然后用液相的时候就用这个吸收值,你说样品不好溶解,可能你的序列含疏水氨基酸比较多,先取一点点用双蒸水溶解,我的好多样品也不溶解,但多多少少水里会溶解一部分的,就取上清液做液相,不是非得全都溶解才行,DMSO加多了不好吧。我也是新手,仅供参考。
3楼2012-11-28 09:37:06
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723889072

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
bluesheart: 金币+1 2012-11-26 08:46:30
我分析的多肽大部分是水溶性的且极性较大,检测波长为210nm
活到老学到老
2楼2012-11-23 13:14:48
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