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高照李木虫 (正式写手)
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PCR技术求助
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我在做几种昆虫的DNA线粒体DNA COI片段，目的基因大小约600-700bp,用pcr扩增COI片段，50μl的扩增反应体系是： Premix Ex Taq 25μl 引物1（LCO1490)（20μM）1μl 引物2 (HCO2198)（20μM）1μl 模板1μl（<50ng）1μl 灭菌蒸馏水 22μl PCR反应程序：94℃预变性3min，94℃变性60s，50℃退火60s，72℃延伸60s，共35个循环，循环结束后，72℃延伸10min。 现在只P出3种，其他的种就是p不出来（都是1个亚科的），模板浓度梯度、退火温度梯度PCR都做了，结果琼脂糖凝胶电泳检测就是没有（空白对照也做了应该不是引物的问题），不知道哪位高人能帮帮分析一下？ |
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