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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ym6104: 金币+5, ★有帮助 2012-11-15 20:21:38
循环数少点儿试试吧，这个pcr，哎…………
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
11楼2012-11-15 18:52:26
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awenrou

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ym6104: 金币+5 2012-11-15 20:24:16
建议把退火温度降低一点，反应循环数也减少一点
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12楼2012-11-15 19:22:10
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zhoulubin

银虫 (小有名气)
你有想过换个酶试试么？
TaKaRa Taq是入门级的，可以用TaKaRa的ExTaq，还有反应体系加大也会好一点。
本来50微升体系，酶才加0.25，体系小了，酶会无意识加多的，因为酶很粘稠，没加多了反而抑制反应或者是有非特异性扩增，电泳结果就是拖尾，上样孔很亮。
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
13楼2012-11-15 20:21:33
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by awenrou at 2012-11-15 19:22:10
建议把退火温度降低一点，反应循环数也减少一点

退火温度是做了T度之后确定的最佳退火温度。。。现在我纳闷的是之前什么条件都是一样的，怎么就能出得来呢？
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14楼2012-11-15 20:23:38
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-15 18:52:26
循环数少点儿试试吧，这个pcr，哎…………

我现在纳闷的是为什么之前什么条件都一样却能出得来呢？
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15楼2012-11-15 20:24:07
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by review at 2012-11-15 16:28:37
引物的问题   换个引物

我现在纳闷的是为什么之前什么条件都一样却能出得来呢？
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16楼2012-11-15 20:24:43
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 大海一孤舟 at 2012-11-15 16:57:45
不要忘记考虑你的仪器和设定的程序

我现在纳闷的是为什么之前什么条件都一样却能出得来呢？
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17楼2012-11-15 20:25:18
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by meldoyren at 2012-11-15 17:04:42
可以试着改变Mg2+浓度，或者可以尝试加入DMSO，但是缺点是非特异性增加，可能会出现点突变。供参考

我现在纳闷的是为什么之前什么条件都一样却能出得来呢？
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18楼2012-11-15 20:25:43
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhoulubin at 2012-11-15 20:21:33
你有想过换个酶试试么？
TaKaRa Taq是入门级的，可以用TaKaRa的ExTaq，还有反应体系加大也会好一点。
本来50微升体系，酶才加0.25，体系小了，酶会无意识加多的，因为酶很粘稠，没加多了反而抑制反应或者是有非特 ...

EX taq我试过了出不来条带，之后我才用的更好的LA taq,一直都扩得好好的，是25μL体系加的0.25.。。。就最近也不知道怎么了，什么条件都跟之前一样但就是跑出来这种效果。。。
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19楼2012-11-15 20:28:39
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by ym6104 at 2012-11-15 20:24:07
我现在纳闷的是为什么之前什么条件都一样却能出得来呢？...

这个东西部稳定啊不稳定，我做pcr从来没有稳定过
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
20楼2012-11-15 20:32:07
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