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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选的时候不长单菌落
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-11-14 12:41:47
极有可能氨苄失效...

氨苄  IPTG  这两种抗生素能反复冻融使用吗？
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如果不努力，肯定没收获！
11楼2012-11-14 13:06:09
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-14 08:58:44
说明书上说那种小的菌落是卫星菌落，里面没有质粒，这个是楼主的培养时间有点长，可以在培养的阶段观察一下
我们做的时候只把Amp加里面，IPTG和X-Gal 是凃板前凃在培养基上

那凃IPTG和X-Gal 的时候是不是得等到把它们都凃进去，培养基干了才能凃连接产物啊？
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如果不努力，肯定没收获！
12楼2012-11-14 13:07:50
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-14 16:43:48
1：涂平板的时候没有涂干.
2：抗生素浓度不对，AMP一般终浓度100ug/ml.
3：培养基温度太高，加抗生素进去失活了，一般在培养基大约50℃左右加入，根据经验可以在手心碰瓶壁5s不烫手即可加入，或者从灭菌锅拿出来后放入50℃培养箱，过个十几分钟再加入抗生素混匀倒平板.
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没入尘埃5
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
13楼2012-11-14 14:58:52
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-14 13:06:09
氨苄  IPTG  这两种抗生素能反复冻融使用吗？...

能，但氨苄容易失效
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没入尘埃5
jiayoubashaonian
14楼2012-11-14 16:26:39
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天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
其实像你这种状况，一方面要找原因，另一方面就是从新做一次，把用到的试剂什么的全部换了，说不定问题就解决了，别一直等值，浪费时间，说不定就是那种试剂掺杂了其他东西，或者失效什么的
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没入尘埃5
15楼2012-11-14 17:05:23
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是氨苄失效了，我实验室出现这种情况。怎么做就是没单菌落，新配的氨苄后结果就好了。
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没入尘埃5
hehe
16楼2012-11-14 19:39:35
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-14 13:07:50
那凃IPTG和X-Gal 的时候是不是得等到把它们都凃进去，培养基干了才能凃连接产物啊？...

是啊，一般等20分钟后才可以
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没入尘埃5
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
17楼2012-11-14 23:29:27
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-14 13:05:01
这个不知道是怎么了，时间都已经短了，还是这样...

这个情况我也不清楚啦…………不好意思啊
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
18楼2012-11-14 23:30:41
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
17楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-14 23:29:27
是啊，一般等20分钟后才可以...

嗯，好的，谢谢啦！
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如果不努力，肯定没收获！
19楼2012-11-15 10:23:46
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-11-14 19:39:35
是氨苄失效了，我实验室出现这种情况。怎么做就是没单菌落，新配的氨苄后结果就好了。

嗯，好的，谢谢啦！我再试试哈
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如果不努力，肯定没收获！
20楼2012-11-15 10:24:16
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