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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选的时候不长单菌落
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

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25楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-15 13:15:11
这样凃板不是得用很长时间吗？好麻烦啊...

我做了几年的分子，有一件事情是很确定的，做分子千万不能嫌麻烦，实验就得按部就班的做，你一步偷懒省个几分钟或者几小时，几天，你后面可能需要几天，几周去弥补，得不偿失.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
31楼2012-11-16 09:15:35
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
没入尘埃5: 金币+3, ★有帮助 2012-11-17 08:17:52
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-19 13:42:15
引用回帖:
26楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-15 13:17:28
对了，还有一个问题，转化的时候42℃水浴能不能用42℃金属浴代替？还有，自己做感受态细胞的话，是不是只要板上长出了菌，即使没有单菌落也算感受态细胞做成功了？...

我们实验室一直用42℃金属浴代替的，注意一点就是，金属浴要盖好盖子，不然温度达不到，升温到42℃后，最好让它保持5Min左右再做转化，有些老式的金属浴里面的金属模块可能年代久了，升温慢.
感受态的话，你可以拿个质粒直接转化进去看看转化效率.
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32楼2012-11-16 09:17:33
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
没入尘埃5: 金币+1 2012-11-17 08:19:42
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-19 13:42:25
最大可能就是污染了杂菌和抗生素失效，可以做个两个对照，一个只涂感受态细胞，一个只涂质粒，再涂一个转化的菌，三个同时按转化的过程做。另外放一个什么都没涂的板，总共四个板。不涂的长了，说明抗生素污染；不涂东西的没长，如果感受态细胞那个长了，说明感受态污染了；前三个没长，转化的菌长了，完全正确。
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33楼2012-11-16 10:39:16
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
没入尘埃5: 金币+1, ★有帮助 2012-11-17 08:23:06
引用回帖:
8楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-14 13:02:58
我觉得也是应该这样的，我有个同学说大肠杆菌晚上才长，白天不长，谢谢！...

重来没听过白天不长的说法，我就经常早上铺板，晚上挑菌
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34楼2012-11-16 11:13:36
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
没入尘埃5: 金币+1, ★有帮助 2012-11-17 08:27:14
最大可能就是污染了杂菌和抗生素失效，可以做个两个对照，一个只涂感受态细胞，一个只涂质粒，再涂一个转化的菌，三个同时按转化的过程做。另外放一个什么都没涂的板，总共四个板。不涂的长了，说明抗生素污染；不涂东西的没长，如果感受态细胞那个长了，说明感受态污染了；前三个没长，转化的菌长了，完全正确。
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35楼2012-11-16 11:16:55
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
没入尘埃5: 金币+1 2012-11-17 08:22:37
引用回帖:
30楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-16 07:55:44
那就是一管的转化产物只能凃一板了，那样不会浓度太大吗？会不会长太多啊？...

你不是没长出来吗？你也可以涂几个板，但好像没多大意义。以我的经验，只要涂的质粒浓度不是太大，是可以挑出单菌落的。连接产物更没问题。
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
36楼2012-11-16 18:34:05
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
33楼: Originally posted by wangqi20092 at 2012-11-16 10:39:16
最大可能就是污染了杂菌和抗生素失效，可以做个两个对照，一个只涂感受态细胞，一个只涂质粒，再涂一个转化的菌，三个同时按转化的过程做。另外放一个什么都没涂的板，总共四个板。不涂的长了，说明抗生素污染；不涂 ...

谢谢！我这次主要是氨苄失效了
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如果不努力，肯定没收获！
37楼2012-11-17 08:19:36
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
36楼: Originally posted by zhoulubin at 2012-11-16 18:34:05
你不是没长出来吗？你也可以涂几个板，但好像没多大意义。以我的经验，只要涂的质粒浓度不是太大，是可以挑出单菌落的。连接产物更没问题。...

谢谢！现在好了，主要是我的氨苄失效了
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如果不努力，肯定没收获！
38楼2012-11-17 08:22:32
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
34楼: Originally posted by huoyongting at 2012-11-16 11:13:36
重来没听过白天不长的说法，我就经常早上铺板，晚上挑菌...

谢谢！下次试试，要不然每天回去的时间太晚，都到11点才能回去，早上7点又得到
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如果不努力，肯定没收获！
39楼2012-11-17 08:23:45
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
31楼: Originally posted by Marado at 2012-11-16 09:15:35
我做了几年的分子，有一件事情是很确定的，做分子千万不能嫌麻烦，实验就得按部就班的做，你一步偷懒省个几分钟或者几小时，几天，你后面可能需要几天，几周去弥补，得不偿失....

嗯，好的，谢谢！现在我的单菌落出来了，没有蓝斑，就在4℃冰箱里放了一天，但是蓝斑一直都没有，就这样挑的。我还有个问题，蓝白斑筛选完之后，挑斑摇菌的步骤中，往LB液体培养基中加氨苄在接菌前，还是接菌后有影响吗？
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如果不努力，肯定没收获！
40楼2012-11-17 13:11:24
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