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huangq816

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC 空白干扰的问题

我最近在做一个产品的方法开发,发现用NH4H2PO4-乙腈做流动相,空白总是有很多鬼峰出现。色谱条件如下:

色谱柱:Zorbax Eclipse Plus C8 4.6mm×150mm, 5μm或等同色谱柱。

流动相:

-       流动相A:称取磷酸二氢铵2.3g,加水1000mL使溶解;

-       流动相B:乙腈。
时间(min)     流动相B(%)
             0:            8
        0-18:        8-20
        18-30:        20-55
        30-35:         55
平衡时间:5min。
流速:1.5mL/min。
柱温:40°C。
检测波长:250nm。
进样量:10μL。
其实,这个色谱条件已经达到预期的目标了,可以让主峰和各个杂质达到完全分离,可是在22-35分钟之间总有一些鬼峰出现,它们可能会干扰杂质峰的定量测定。我想问问这是什么问题?有什么解决的方法么?
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人生就像一场马拉松,跑的最快的未必是笑到最后的!
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chunxiaxhg

银虫 (初入文坛)

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感谢参与,应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 感谢参与 2012-11-14 15:35:26
流动相有问题的可能性不大,从出鬼峰的时间上看,应该是你的梯度本身引起的峰
4楼2012-11-14 15:33:25
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普通回帖

marktiger

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
huangq816: 金币+1, 有帮助, 谢谢!有可能吧 2012-11-13 16:08:02
是不是你试剂的问题,换个厂家的试剂试试。
marktigerchen
2楼2012-11-13 16:03:26
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my1367621657

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 感谢参与 2012-11-14 15:35:20
走一针空白溶剂看看,还是有的话你的流动相可能有问题
love is power
3楼2012-11-14 14:53:51
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深蓝淡蓝

木虫 (职业作家)

三月(*^__^*)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
marktiger: 金币+1, 谢谢参与,欢迎常来。 2012-11-16 08:36:16
多平衡一会,进一针流动看看是不是所用的试剂有问题,还有就是溶样品的溶剂也进一针,看看溶剂好着没。然后还有柱子本身或者冲洗好没。还有仪器的问题,我们有个仪器走梯度就不行
每天开心就笑,累了就睡觉,醒了就微笑。生活,没什么大不了!
5楼2012-11-14 16:00:55
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zhihua0207

木虫 (正式写手)


marktiger: 金币+1, 谢谢参与,欢迎常来。 2012-11-16 08:36:58
这个是走梯度最让人头疼的事,一般都不是试剂的问题,只要你的A液没有什么浑浊之类的问题就差不多,实在不行可以适当改变一下梯度。
立志改变,勇于超越
6楼2012-11-15 09:00:12
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ss3115

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
marktiger: 金币+1, 谢谢参与,欢迎常来。 2012-11-16 08:36:50
我们以前也出现过这样的情况,建议更换试剂为进口的色谱纯,水使用超纯水或哇哈哈纯净水。
7楼2012-11-15 10:58:40
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

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marktiger: 金币+1, 谢谢参与,欢迎常来。 2012-11-16 08:36:42
我用磷酸二氢铵的时候之前也出现这样的情况,后来平衡时间久了,它就没有再出现鬼峰了。
8楼2012-11-15 13:49:04
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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首先考虑色谱条件,是否梯度引起得偏移,其次排除流动相问题,如试剂、试药、水。金属杂质限度高,都会显鬼峰。
守候在风中的宁静。
9楼2012-11-16 08:44:13
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cdccd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ss3115 at 2012-11-15 10:58:40
我们以前也出现过这样的情况,建议更换试剂为进口的色谱纯,水使用超纯水或哇哈哈纯净水。

乐百氏比哇哈哈和屈臣氏更好,就是现在不太好买了。
忠厚啊!你正是无能的别名!
10楼2012-11-16 10:33:57
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