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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » HPLC 空白干扰的问题
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huangq816

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC 空白干扰的问题

我最近在做一个产品的方法开发，发现用NH4H2PO4-乙腈做流动相，空白总是有很多鬼峰出现。色谱条件如下：

色谱柱：Zorbax Eclipse Plus C8 4.6mm×150mm, 5μm或等同色谱柱。

流动相：

-       流动相A：称取磷酸二氢铵2.3g，加水1000mL使溶解；

-       流动相B：乙腈。
时间（min）     流动相B(%)
             0：            8
        0-18：        8-20
        18-30:        20-55
        30-35:         55
平衡时间：5min。
流速：1.5mL/min。
柱温：40°C。
检测波长：250nm。
进样量：10μL。
其实，这个色谱条件已经达到预期的目标了，可以让主峰和各个杂质达到完全分离，可是在22-35分钟之间总有一些鬼峰出现，它们可能会干扰杂质峰的定量测定。我想问问这是什么问题？有什么解决的方法么？
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人生就像一场马拉松，跑的最快的未必是笑到最后的！
1楼 2012-11-13 15:31:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chunxiaxhg

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 感谢参与 2012-11-14 15:35:26
流动相有问题的可能性不大，从出鬼峰的时间上看，应该是你的梯度本身引起的峰
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4楼2012-11-14 15:33:25
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普通回帖

marktiger

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
huangq816: 金币+1, ★有帮助, 谢谢！有可能吧 2012-11-13 16:08:02
是不是你试剂的问题，换个厂家的试剂试试。
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marktigerchen
2楼2012-11-13 16:03:26
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my1367621657

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 感谢参与 2012-11-14 15:35:20
走一针空白溶剂看看，还是有的话你的流动相可能有问题
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love is power
3楼2012-11-14 14:53:51
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深蓝淡蓝

木虫 (职业作家)

三月(*^__^*)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
marktiger: 金币+1, 谢谢参与，欢迎常来。 2012-11-16 08:36:16
多平衡一会，进一针流动看看是不是所用的试剂有问题，还有就是溶样品的溶剂也进一针，看看溶剂好着没。然后还有柱子本身或者冲洗好没。还有仪器的问题，我们有个仪器走梯度就不行
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每天开心就笑，累了就睡觉，醒了就微笑。生活，没什么大不了！
5楼2012-11-14 16:00:55
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zhihua0207

木虫 (正式写手)
★
marktiger: 金币+1, 谢谢参与，欢迎常来。 2012-11-16 08:36:58
这个是走梯度最让人头疼的事，一般都不是试剂的问题，只要你的A液没有什么浑浊之类的问题就差不多，实在不行可以适当改变一下梯度。
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立志改变，勇于超越
6楼2012-11-15 09:00:12
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ss3115

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
marktiger: 金币+1, 谢谢参与，欢迎常来。 2012-11-16 08:36:50
我们以前也出现过这样的情况，建议更换试剂为进口的色谱纯，水使用超纯水或哇哈哈纯净水。
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7楼2012-11-15 10:58:40
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
marktiger: 金币+1, 谢谢参与，欢迎常来。 2012-11-16 08:36:42
我用磷酸二氢铵的时候之前也出现这样的情况，后来平衡时间久了，它就没有再出现鬼峰了。
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8楼2012-11-15 13:49:04
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先考虑色谱条件，是否梯度引起得偏移，其次排除流动相问题，如试剂、试药、水。金属杂质限度高，都会显鬼峰。
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守候在风中的宁静。
9楼2012-11-16 08:44:13
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cdccd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ss3115 at 2012-11-15 10:58:40
我们以前也出现过这样的情况，建议更换试剂为进口的色谱纯，水使用超纯水或哇哈哈纯净水。

乐百氏比哇哈哈和屈臣氏更好，就是现在不太好买了。
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忠厚啊！你正是无能的别名！
10楼2012-11-16 10:33:57
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