9楼: Originally posted by liuan6126 at 2012-11-13 13:50:52
一般都在T载体上做好了，测序正确了再导入目的载体，你直接在目的载体上做，12 K是蛮大的，延伸时间12 min，是很难PCR出来的。希望对您有用。...

14楼: Originally posted by timmychina at 2012-11-14 12:08:47
也是全式金的  FM111...

15楼: Originally posted by zhoumin1108 at 2012-11-14 13:53:46
做点突变根本不需要kit,也不需要PCR全长质粒,用overlapPCR直接PCR突变基因就可以了,还不需要dpnI酶切.

17楼: Originally posted by linxt2005 at 2012-11-16 15:59:37
直接扩也是可行的，不过需要使用强悍一点的聚合酶，PCR然后DpnI，再然后转化就可以了。聚合酶用过一款叫Phusion的不错。
overlap也是可行的，
T载体也不赖，就是还都要酶切连接，比较麻烦。

27楼: Originally posted by lxbxk at 2012-11-21 10:57:21
两个T载体都可以，我做过最长为11K的点突变，用的TakaRa的Primestar，能P出来，一定注意的是循环数最好不要超过18个，我一般都是用16个循环，你可以尝试一下，祝你好运1

29楼: Originally posted by lxbxk at 2012-11-21 11:18:03
嗯，必须要循环数少一些，我做过相关的实验，18个以上基本上P不出来的，我的做出来了呀，屡试不爽，呵呵，你可以试试的