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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 亲们,你们做定点突变么?

最近在做定点突变,用的trans的定点突变的试剂盒,但是就是没有条带,我是希望在病毒基因组全场位置上突变两个碱基,有做过的人,能稍微知道下么,病毒基因组加上质粒载体一共12k,trans公司的人说可能是由于模板比较大的原因,你们做定点突变都是怎么做的,有什么经验能分享么,每次PCR都是P不出来,快郁闷死了。。。
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
29楼: Originally posted by lxbxk at 2012-11-21 11:18:03
嗯,必须要循环数少一些,我做过相关的实验,18个以上基本上P不出来的,我的做出来了呀,屡试不爽,呵呵,你可以试试的

嗯嗯,因为我用的是全式金的,上面写的是25个循环,也不知道跟产品是不是相关,我再试试看看,如果25的循环数还P不出来的话我就降低循环数看看,你那个takara的试剂盒上面建议的是多少循环啊?
30楼2012-11-21 12:04:33
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议在T载体上突变好了再连目标载体,载体太大了,PCR不大容易
2楼2012-11-11 11:14:58
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 编辑内容 2013-05-29 19:30
确实是因为模板太大的原因,现有的聚合酶扩增不了这么大的片段,建议交给公司做吧

[ Last edited by gyesang on 2013-5-29 at 19:30 ]
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
3楼2012-11-12 14:29:44
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuan6126 at 2012-11-11 11:14:58
建议在T载体上突变好了再连目标载体,载体太大了,PCR不大容易

在T载体上做好突变?这样子是不是比较容易?你之前有做过么,有成功的例子没?
4楼2012-11-12 15:54:32
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