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caibaowei12

金虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我分析提的总RNA

电泳图2Kmarker,3个样品。用trizol标准步骤提取的总rna。3个样品测得OD值260/280都在1.9-2.05之间。
1、跑胶怎么会有多条条带,是不是有可能是DNA?
2、条带大小不符合28s 18s 5sRNA大小?

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caibaowei12

金虫 (小有名气)

caibaowei12: 回帖置顶 2012-11-07 23:05:14
引用回帖:
2楼: Originally posted by lmcyjxs at 2012-11-06 00:16:42
你跑胶的时间是不是太长了?看上去离孔那么远?其次有DNA污染的话应该在孔附近吧,你跑个15min试试看?

1图是:用这次的mRNA反转成cDNA作为模板 设计的引物进行PCR扩增结果有产物的出现目的条带,
问题:我反战的cDNA测浓度有1000ng/ul,260/280=1.81我用反转的cDNA跑电泳看不到条带是怎么回事?(上样量2ul)

2图是:用mRNA作为模板 设计的引物进行PCR扩增结果lane1出现了微弱目的条带。
是不是证明了我的mRNA中有微弱的DNA存在?

1.jpg



2.jpg

努力做科研,努力做人,
4楼2012-11-07 23:04:41
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普通回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)

你跑胶的时间是不是太长了?看上去离孔那么远?其次有DNA污染的话应该在孔附近吧,你跑个15min试试看?
思路决定出路。。。
2楼2012-11-06 00:16:42
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huanancy2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-06 17:17:06
OD值260/280都在1.9-2.05之间,说明你的RNA质量不错,但还有一条带,如在点样空较近的话,应该是DNA污染,下次可要注意了,RNA的量宁可少一些,但不要有污染,如提DNA也一样,宁可少点,不要有蛋白质污染。
淡定人生!
3楼2012-11-06 00:33:43
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zhangxihe

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你反转时用的是 OLIGO DT吧  我觉得用跑cDNA胶没什么意义,直接做PCR看看么,下图那个不知道是多大的带 可能是引物二聚体,不能说明是DNA污染吧, 如果你P的杂带多了 可以用DNase消化下试试么
5楼2012-12-26 19:26:35
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