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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮我分析提的总RNA
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caibaowei12

金虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我分析提的总RNA

电泳图2Kmarker，3个样品。用trizol标准步骤提取的总rna。3个样品测得OD值260/280都在1.9-2.05之间。
1、跑胶怎么会有多条条带，是不是有可能是DNA?
2、条带大小不符合28s 18s 5sRNA大小？

未 命名.jpg
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努力做科研，努力做人，
1楼 2012-11-05 23:58:19
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回帖置顶 ( 共有1个 )

caibaowei12

金虫 (小有名气)
caibaowei12: 回帖置顶 2012-11-07 23:05:14
引用回帖:
2楼: Originally posted by lmcyjxs at 2012-11-06 00:16:42
你跑胶的时间是不是太长了？看上去离孔那么远？其次有DNA污染的话应该在孔附近吧，你跑个15min试试看？

1图是：用这次的mRNA反转成cDNA作为模板 设计的引物进行PCR扩增结果有产物的出现目的条带，
问题：我反战的cDNA测浓度有1000ng/ul，260/280=1.81我用反转的cDNA跑电泳看不到条带是怎么回事?(上样量2ul）

2图是：用mRNA作为模板 设计的引物进行PCR扩增结果lane1出现了微弱目的条带。
是不是证明了我的mRNA中有微弱的DNA存在？

1.jpg



2.jpg
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努力做科研，努力做人，
4楼2012-11-07 23:04:41
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普通回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)
你跑胶的时间是不是太长了？看上去离孔那么远？其次有DNA污染的话应该在孔附近吧，你跑个15min试试看？
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思路决定出路。。。
2楼2012-11-06 00:16:42
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huanancy2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-06 17:17:06
OD值260/280都在1.9-2.05之间，说明你的RNA质量不错，但还有一条带，如在点样空较近的话，应该是DNA污染，下次可要注意了，RNA的量宁可少一些，但不要有污染，如提DNA也一样，宁可少点，不要有蛋白质污染。
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淡定人生！
3楼2012-11-06 00:33:43
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zhangxihe

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你反转时用的是 OLIGO DT吧  我觉得用跑cDNA胶没什么意义，直接做PCR看看么，下图那个不知道是多大的带 可能是引物二聚体，不能说明是DNA污染吧， 如果你P的杂带多了 可以用DNase消化下试试么
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5楼2012-12-26 19:26:35
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