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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大家用过什么好的浓缩蛋白的方法？蛋白溶液有 30ml
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

[交流] 大家用过什么好的浓缩蛋白的方法？蛋白溶液有 30ml

蛋白溶液有 30ml ，分子量57KD    浓度达不到实验要求，想浓缩一下，有没有人用过变色硅胶包埋透析袋的方法

就是把透析袋包埋在变色硅胶珠子中，放在密封保鲜盒里，把保鲜盒放在4度，等硅胶有一半变色时候再取出来

或者大家有什么好的，便捷的浓缩方法，希望能交流一下

[ Last edited by 阿娇阿娇 on 2012-11-5 at 11:32 ]
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1楼 2012-11-05 09:49:02
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
不知道你蛋白分子量多大，如果合适的话可以选择 超滤离心管
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2楼2012-11-05 10:57:13
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-11-05 10:57:13
不知道你蛋白分子量多大，如果合适的话可以选择 超滤离心管

分子量 57 KD，貌似超滤的体积很小吧？我总共有30ml呢
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3楼2012-11-05 11:31:55
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-11-05 11:31:55
分子量 57 KD，貌似超滤的体积很小吧？我总共有30ml呢...

可以，millipor有3kd，10kd的，超滤这个蛋白足够了，最小能浓缩到几百微升，一个管可以浓缩15ml的样品

[ Last edited by xiaoqi5992 on 2012-11-5 at 13:03 ]
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4楼2012-11-05 13:01:50
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-11-04 15:31:55
分子量 57 KD，貌似超滤的体积很小吧？我总共有30ml呢...

超滤离心管也有大管的，可以一次加15ml，你30ml两次就可以浓缩完。
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5楼2012-11-05 13:08:37
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by stone2239 at 2012-11-05 13:08:37
超滤离心管也有大管的，可以一次加15ml，你30ml两次就可以浓缩完。...

嗯，谢谢，我想先试试变色硅胶包埋的方法
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8楼2012-11-05 13:41:43
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-11-05 13:01:50
可以，millipor有3kd，10kd的，超滤这个蛋白足够了，最小能浓缩到几百微升，一个管可以浓缩15ml的样品
...

嗯，谢谢，我想先试试变色硅胶包埋的方法
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9楼2012-11-05 13:41:53
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遥控器68

金虫 (小有名气)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by stone2239 at 2012-11-05 13:08:37
超滤离心管也有大管的，可以一次加15ml，你30ml两次就可以浓缩完。...

最近也在用milipore的超滤管，一次4ml，您所说的一次15ml的好用不？可以考虑买了试试。
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14楼2012-11-05 17:43:17
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zuoxin

银虫 (小有名气)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
弱弱地说一下，曾经用过聚乙二醇浓缩、、、、
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15楼2012-11-05 18:29:07
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syhorchid

木虫之王 (文学泰斗)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
试试冷冻浓缩吧
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16楼2012-11-05 18:53:24
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
超滤浓缩管效果还是可以..millipore等..
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17楼2012-11-05 19:21:35
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dy_414

木虫 (正式写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
硅胶包埋弄不好可能对透析袋造成损失，用超滤吧milipore的六十多块钱一个，30 ml两个小时搞定

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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18楼2012-11-05 23:11:39
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
用透析袋，铺在聚乙二醇20000上浓缩
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19楼2012-11-05 23:52:21
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huanancy2012

银虫 (小有名气)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
如果对蛋白质的活性不要求，可直接加热，将多余的水分挥发掉，注意时刻加热注意温度不要太高，保证沸腾即可。如果要求活性，可以用抽真空的方式，将多余的水分除掉。还有就是，将蛋白溶液装在透析袋中，用蔗糖包埋，速度也很很快，放在4度可保活性。
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20楼2012-11-06 01:14:14
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foryever

木虫 (文坛精英)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
有条件用超滤就超滤吧，透析袋包埋操作起来比超滤复杂，而且不小心浓缩过度导致蛋白析出也是有可能的
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阿娇阿娇
21楼2012-11-06 11:19:51
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
21楼: Originally posted by foryever at 2012-11-06 11:19:51
有条件用超滤就超滤吧，透析袋包埋操作起来比超滤复杂，而且不小心浓缩过度导致蛋白析出也是有可能的

我觉得透析袋包埋挺方便的啊，不过就是得一直观察着硅胶颜色变化。
请问你用过这种方法吗？不知道变色硅胶还有什么缺点啊？
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22楼2012-11-06 12:12:02
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
变色硅胶包埋,这个我做过，当时是用透析袋直接放在干燥剂里面。过1个小时就能发现体积变小了。很简单
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阿娇阿娇
23楼2012-11-06 14:41:27
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
23楼: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-11-06 14:41:27
变色硅胶包埋,这个我做过，当时是用透析袋直接放在干燥剂里面。过1个小时就能发现体积变小了。很简单

谢谢，我很疑惑，这种方法感觉是很简单啊，可是怎么没有得到推广呢，大家用的不多啊，是不是有什么缺点呢？
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24楼2012-11-06 15:33:50
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by dy_414 at 2012-11-05 23:11:39
硅胶包埋弄不好可能对透析袋造成损失，用超滤吧milipore的六十多块钱一个，30 ml两个小时搞定

硅胶包埋弄不好可能对透析袋造成损失？
为什么呢？操作时候需要注意什么呢？
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25楼2012-11-06 21:21:09
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-11-06 14:41:27
变色硅胶包埋,这个我做过，当时是用透析袋直接放在干燥剂里面。过1个小时就能发现体积变小了。很简单

还想问一下，是先在PBS里面透析再包埋？还是先包埋再透析？
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26楼2012-11-06 21:22:48
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)
当时我是先透析，然后再包埋的
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38楼2012-11-07 08:25:10
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
25楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-11-06 21:21:09
硅胶包埋弄不好可能对透析袋造成损失？
为什么呢？操作时候需要注意什么呢？...

透析袋难道还要回收再利用吗？，操作的时候只要注意不要把透析袋弄破了就行。注意观察体积的变化。时间太长了浓缩得很高
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39楼2012-11-07 08:28:53
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
26楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-11-06 21:22:48
还想问一下，是先在PBS里面透析再包埋？还是先包埋再透析？...

我当时是先透析，然后再包埋的
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40楼2012-11-07 08:30:09
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
39楼: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-11-07 08:28:53
透析袋难道还要回收再利用吗？，操作的时候只要注意不要把透析袋弄破了就行。注意观察体积的变化。时间太长了浓缩得很高...

好的，谢谢

不过平常我们不浓缩，只在PBS里面透析的话，一个透析袋是用了3次的
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41楼2012-11-07 14:22:31
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sunxu7213976

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
41楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-11-07 14:22:31
好的，谢谢

不过平常我们不浓缩，只在PBS里面透析的话，一个透析袋是用了3次的...

你们好节约啊，我都是一次性的
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42楼2012-11-07 23:50:11
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
浓缩方法有很多种
1.可以加入60%固体硫酸铵，直接将目的蛋白沉淀出来，然后再溶解。或加入有机试剂沉淀均可。
2.PEG浓缩，将样品装入透析袋（3KD-10KD均可），然后包埋在PEG20000中，这种方法和你的变色硅胶相似，但问题是易受PEG污染，清洗干净没问题。
3.超滤浓缩：用3KD-10KD的超滤管，3500-3800rpm离心，即可。
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阿娇阿娇
43楼2012-11-08 08:43:15
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
wizardfan: 请给适当金币奖励，如果觉得有道理/有帮助的话。 2012-12-04 05:28:38
引用回帖:
43楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-08 08:43:15
浓缩方法有很多种
1.可以加入60%固体硫酸铵，直接将目的蛋白沉淀出来，然后再溶解。或加入有机试剂沉淀均可。
2.PEG浓缩，将样品装入透析袋（3KD-10KD均可），然后包埋在PEG20000中，这种方法和你的变色硅胶相似， ...

非常感谢
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44楼2012-11-08 09:26:38
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
一般都是用超滤管
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45楼2012-11-08 10:15:54
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lksyb

金虫 (正式写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
没什么特别要求就用超滤管吧，简单方便
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47楼2012-12-03 22:08:16
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laoboshihou

金虫 (正式写手)
★
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
可以，millipor有3kd，10kd的，超滤这个蛋白足够了，最小能浓缩到几百微升，一个管可以浓缩15ml的样品
赞一下 回复此楼
49楼2012-12-04 08:31:23
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简单回复
残暴的肉球6楼
2012-11-05 13:24   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
xjy07917楼
2012-11-05 13:30   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
gkf12310楼
2012-11-05 13:55   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
58325060811楼
2012-11-05 14:13   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
puluo-88031212楼
2012-11-05 14:18   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
20091262213楼
2012-11-05 14:40   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
祝福
ph0318102127楼
2012-11-06 22:08   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
tory0428楼
2012-11-06 22:13   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
lilyjun29楼
2012-11-06 22:18   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
菜葱雨30楼
2012-11-06 22:25   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
91088397431楼
2012-11-06 22:31   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
我是小乖乖32楼
2012-11-06 22:35   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
wasxnbe33楼
2012-11-06 22:36   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
珍儿的世界34楼
2012-11-06 22:46   回复  
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blackdogzmz35楼
2012-11-06 22:59   回复  
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92987864036楼
2012-11-07 00:05   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
a [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
kiss2008553737楼
2012-11-07 02:56   回复  
阿娇阿娇(金币+1): 谢谢参与
yhtao46楼
2012-11-12 05:08   回复  
wizardfan48楼
2012-12-04 05:28   回复  
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su-b0850楼
2012-12-04 11:31   回复  
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