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银虫 (小有名气)

[求助] 130kd的蛋白怎么才能清晰的跑出来呢？

我要用聚丙烯酰胺凝胶跑出130kd的蛋白，每次跑出来大条带都很模糊或者看不到，小条带基本清楚，分别用12%，10%，8%的分离胶跑过，情况差不多，浓缩胶4%，大家有什么好建议吗？之前有一次条带跑的特别清楚的，之后再也跑不出来了。

一辈子没有多长，一定要活的有意义。

1楼 2013-05-29 16:47:21

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新虫 (小有名气)

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cuijiaoyan: 金币+3, ★有帮助 2013-06-01 17:31:42

1。上样buffer 里面有没有dtt？
2. 可以去少量你的蛋白透析到8m尿素中，取样跑电泳
3. 低电压跑，12ov左右，我用的是mops缓冲液

2楼2013-05-31 12:58:02

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银虫 (小有名气)

引用回帖:

2楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-31 12:58:02
1。上样buffer 里面有没有dtt？
2. 可以去少量你的蛋白透析到8m尿素中，取样跑电泳
3. 低电压跑，12ov左右，我用的是mops缓冲液

我用的是非还原性的buffer，你用的分离胶是多大浓度的呢？我一般是80V跑半个小时，再用120V跑。我没有做过透析，透析是为了去杂蛋白而得到一种或者几种目的蛋白吗？

一辈子没有多长，一定要活的有意义。

3楼2013-05-31 22:28:15

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银虫 (小有名气)

mops缓冲液是什么缓冲液呢？效果好吗？我查不见配方。我一般用的是我们实验室常用的电泳缓冲液，里面包括SDS,甘氨酸，TRIS.

一辈子没有多长，一定要活的有意义。

4楼2013-05-31 22:36:59

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