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cuijiaoyan

银虫 (小有名气)

[求助] 130kd的蛋白怎么才能清晰的跑出来呢?

我要用聚丙烯酰胺凝胶跑出130kd的蛋白,每次跑出来大条带都很模糊或者看不到,小条带基本清楚,分别用12%,10%,8%的分离胶跑过,情况差不多,浓缩胶4%,大家有什么好建议吗?之前有一次条带跑的特别清楚的,之后再也跑不出来了。
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一辈子没有多长,一定要活的有意义。
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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cuijiaoyan: 金币+3, ★有帮助 2013-06-01 17:31:42
1。上样buffer 里面有没有dtt?
2.  可以去少量你的蛋白透析到8m尿素中,取样跑电泳
3. 低电压跑,12ov左右,我用的是mops缓冲液
2楼2013-05-31 12:58:02
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cuijiaoyan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-31 12:58:02
1。上样buffer 里面有没有dtt?
2.  可以去少量你的蛋白透析到8m尿素中,取样跑电泳
3. 低电压跑,12ov左右,我用的是mops缓冲液

我用的是非还原性的buffer,你用的分离胶是多大浓度的呢?我一般是80V跑半个小时,再用120V跑。我没有做过透析,透析是为了去杂蛋白而得到一种或者几种目的蛋白吗?
一辈子没有多长,一定要活的有意义。
3楼2013-05-31 22:28:15
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cuijiaoyan

银虫 (小有名气)

mops缓冲液是什么缓冲液呢?效果好吗?我查不见配方。我一般用的是我们实验室常用的电泳缓冲液,里面包括SDS,甘氨酸,TRIS.
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4楼2013-05-31 22:36:59
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