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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

[求助] T载体克隆

我T载体克隆后,利用菌液pcr能扩出目的条带,可是为什么提取的质粒大小不对呢,有谁能给我解惑啊
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒酶切后变大还是什么?PCR不是一定说明克隆成功哦
修炼ing,当虫仙……
2楼2012-11-04 18:34:03
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
说明你得到的不一定是目的基因,再做一次pcr,确认一下
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
3楼2012-11-04 18:51:07
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竹子小小

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的PCR条带真的正确吗?是不是错配的
4楼2012-11-04 19:24:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你做单酶切后质粒是多大的,和理论值差多少?首先确定PCR产物正确,其次可能是连接时载体和目的片段的比例不对而造成连入两个目的片段。
5楼2012-11-05 01:14:46
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1:菌落PCR麽?这个向来都是不准的,菌落PCR正确的不一定是阳性克隆.
2:单酶切验证一下吧,要不了多久,质粒量少的话,5~6小时就可以看结果.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
8楼2012-11-05 09:18:04
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有酶切的质粒跟质粒实际的大小相差较大,建议酶切后再次电泳检测
9楼2012-11-05 10:35:59
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普通回帖

bonbonzd

木虫 (小有名气)

提取的质粒直接电泳,还是单酶切后电泳?
6楼2012-11-05 08:15:17
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by j2 at 2012-11-04 18:34:03
质粒酶切后变大还是什么?PCR不是一定说明克隆成功哦

没有酶切呢,就是先提质粒看看,感觉提的质粒都是空载
7楼2012-11-05 09:15:25
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果插入片段大的话,质粒大小或许有差别,如果不大的的话,可能看不出来
jiayoubashaonian
10楼2012-11-05 11:21:45
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