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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T载体克隆
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不酶切质粒一般跑电泳不能确定是不是你所要的目的质粒，建议酶切完和原质粒一块跑电泳
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11楼2012-11-05 14:01:54
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zoeye

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液PCR很容易P出假阳性的 你应该抽质粒 然后再P
或者直接酶切质粒
PCR的时候要注意阴阳对照的设置
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12楼2012-11-05 14:58:23
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zoeye at 2012-11-05 14:58:23
菌液PCR很容易P出假阳性的 你应该抽质粒 然后再P
或者直接酶切质粒
PCR的时候要注意阴阳对照的设置

可是，为什么会出现假阳性呢
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13楼2012-11-05 17:13:21
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zj7616

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你这种情况我也遇到过，一个笨方法，你将所选白斑（单克隆）重新画线，再挑单克隆，如果菌液pcr能扩出目的条带，提取质粒应该就没什么问题了
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14楼2012-11-16 11:40:00
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天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先酶切一下看看，然后送公司测序，看看到底是啥，反正测序也花不几个钱
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15楼2012-11-16 11:53:39
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lxbxk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议对质粒进行酶切，插入片段较小的话，跑胶浓度提至1.5%，延长跑胶时间，看是否和对照组大小有区别。
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做开心的自己，加油
16楼2012-11-16 12:43:30
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
追梦的人1987: 金币+5 2012-11-22 10:00:50
T载体克隆后一般提质粒酶切鉴定比较准确，菌落PCR结果其实只具有一定的参考价值，不是很准的。。你可以多挑几个质粒然空跑质粒，根据你质粒大小跟你目的片段的大小初步判断是否连接上，然后选择合适的质粒做酶切鉴定。。。
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17楼2012-11-21 12:07:47
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