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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 出不来结果！！！
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山水506

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-08 08:36:35
内参如果有问题的话，那估计就是你提取的蛋白可能有问题了，有降解，应该是，正常讲的话，内参蛋白是很亮的条带

那提蛋白都是照着师姐提取的方法提的啊？难道人跟人提的还有差别？那提蛋白的时候有什么注意事项吗？
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11楼2012-11-08 20:06:16
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山水506

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by tantingting at 2012-11-08 09:45:41
蛋白浓度是多少？上了多少ug？

蛋白浓度有时候3点多四点多，有时候加裂解液和PMSF少点的话，都8点多。不过我一般都上样40ug。。。
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12楼2012-11-08 20:08:53
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-11-09 10:13:57
引用回帖:
11楼: Originally posted by 山水506 at 2012-11-08 20:06:16
那提蛋白都是照着师姐提取的方法提的啊？难道人跟人提的还有差别？那提蛋白的时候有什么注意事项吗？...

别人的实验，你不见得能重复出来，我觉得你可能某一个步骤出现问题，可能是提取蛋白，或者是其他步骤
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13楼2012-11-08 21:32:06
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xukang8843

铜虫 (小有名气)
用的什么方法测得蛋白浓度！
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14楼2012-11-09 21:20:33
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kiss20085537

木虫之王 (文学泰斗)

联合国小木虫水区资深代言人

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

祝福楼主一顺百顺万事顺
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哦吧，江南style，元芳，你怎么看？
15楼2012-11-09 21:31:26
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wsgcc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 山水506 at 2012-11-07 21:24:51
抗体应该都没有问题的，蛋白30~40Kb。250mA转2个小时，师姐能做出来，我就不行。最主要的是我的内参有时候都没有或者很淡。。。急求助啊~~...

250mA转2个小时，是湿转还是半干转？如果半干的话30-40KD的分子量转的时间有点长了。我们这样的只转40-60分钟，还是用PVDF膜，它截留蛋白的能力要强于NC膜。另外：你一抗和二抗没有用错吧？譬如一抗是小鼠来源的，二抗却用了抗兔的二抗？我曾经犯过这样的错。呵呵。
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16楼2012-11-09 23:11:24
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山水506

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by wsgcc at 2012-11-09 23:11:24
250mA转2个小时，是湿转还是半干转？如果半干的话30-40KD的分子量转的时间有点长了。我们这样的只转40-60分钟，还是用PVDF膜，它截留蛋白的能力要强于NC膜。另外：你一抗和二抗没有用错吧？譬如一抗是小鼠来源的， ...

是湿转。一抗和二抗应该没有问题，都是鼠来源的。。。
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17楼2012-11-12 21:23:33
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gao809

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以先增加上样量试试。或者延长一抗时间。也可一抗放置冰箱过夜，第二天再往下做。
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18楼2013-09-04 19:57:13
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