应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于转化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 1084  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 关于转化 已有2人参与

最近做转化，第一次和第二次由于载体的问题，没有成功，在换了载体之后，蓝白斑筛选平板上居然全是白色的菌落，而且pcr鉴定后居然连接成功，真的是很诡异的事情啊，就算连接效率高，也不能全部是白斑吧，各位大神有没有相同经历啊
回复此楼

» 猜你喜欢
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
1楼 2012-10-31 22:07:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-02 13:47:16
当使用双酶切做连接时，如果酶切比较完全，而且连接体系载体：目的片段比例合适，阳性克隆可能接近100%。所以我只有在自连概率大的时候才做蓝白斑筛选。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-01 06:59:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-01 06:59:27
当使用双酶切做连接时，如果酶切比较完全，而且连接体系载体：目的片段比例合适，阳性克隆可能接近100%。所以我只有在自连概率大的时候才做蓝白斑筛选。

问题是只是单酶切啊，纠结
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
3楼2012-11-01 10:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-02 13:47:27
引用回帖:
3楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-01 10:55:08
问题是只是单酶切啊，纠结...

你是否把载体做了去磷酸化处理？如果这样载体不能自连，必需和插入片段连。要么就是你的目的片段也有抗性筛选基因，也可能使筛选板上基本是阳性克隆。当然，如果你的x-gal失效了的话另当别论。
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-01 14:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-01 14:04:42
你是否把载体做了去磷酸化处理？如果这样载体不能自连，必需和插入片段连。要么就是你的目的片段也有抗性筛选基因，也可能使筛选板上基本是阳性克隆。当然，如果你的x-gal失效了的话另当别论。...

额，之前做的时候也怀疑是x-gal失效了，后来换了载体就全是白斑了，pcr也有产物，就是条件老摸索不对，都做过梯度了，还是非特异性太严重
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
5楼2012-11-01 17:10:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-01 17:10:22
额，之前做的时候也怀疑是x-gal失效了，后来换了载体就全是白斑了，pcr也有产物，就是条件老摸索不对，都做过梯度了，还是非特异性太严重...

你是指什么条件不对，非特异性严重又指什么呢？是说菌落PCR吗？
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-02 06:59:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹子小小

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
都连接成功了还有什么好纠结的呢，不成功还白班才应该纠结的吧
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-02 10:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-02 06:59:32
你是指什么条件不对，非特异性严重又指什么呢？是说菌落PCR吗？...

就是pcr摸索不对条件啊，非特异性的条带很多，今天一个同学做那个pcr，居然什么都没有，难道我上次做的是幻觉？、？
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
8楼2012-11-02 20:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-02 10:30:20
都连接成功了还有什么好纠结的呢，不成功还白班才应该纠结的吧

纠结为什么不是一般的状况呢
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
9楼2012-11-02 20:21:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-02 20:20:42
就是pcr摸索不对条件啊，非特异性的条带很多，今天一个同学做那个pcr，居然什么都没有，难道我上次做的是幻觉？、？...

筛阳性克隆的菌落PCR为什么直接用载体的引物？虽然用基因特异引物更好，但你既然把握不好条件，用载体多克隆位点两边的引物更加简单易行。
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-03 07:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 静安jingan 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +4 min3 2026-03-24 5/250 2026-03-30 16:41 by 梨子～
[考研] 329求调剂 +8 星野? 2026-03-26 8/400 2026-03-30 13:41 by chemdavid
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 332求调剂 +6 Lyy930824@ 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:53 by 1172367218
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +10 麻辣鱿鱼 2026-03-27 11/550 2026-03-29 21:52 by nanaliuyun
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +8 柳溪边 2026-03-26 8/400 2026-03-29 20:42 by 唐沐儿
[考研] 343求调剂085601 +3 要努力学习x 2026-03-29 3/150 2026-03-29 18:35 by wxiongid
[考研] 299求调剂 +10 15188958825 2026-03-25 10/500 2026-03-29 17:51 by 王亮_大连医科大
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +7 @taotao 2026-03-29 7/350 2026-03-29 12:03 by longlotian
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 291求调剂 +15 hhhhxn.. 2026-03-23 21/1050 2026-03-28 11:26 by self2008
[考研] 339求调剂，想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 085602 307分 求调剂 +7 不知道叫什么！ 2026-03-26 7/350 2026-03-28 09:57 by 神马都不懂
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 材料292调剂 +12 橘颂思美人 2026-03-23 12/600 2026-03-27 15:44 by caszguilin
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭