应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于转化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1087  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 关于转化 已有2人参与

最近做转化，第一次和第二次由于载体的问题，没有成功，在换了载体之后，蓝白斑筛选平板上居然全是白色的菌落，而且pcr鉴定后居然连接成功，真的是很诡异的事情啊，就算连接效率高，也不能全部是白斑吧，各位大神有没有相同经历啊
回复此楼

» 猜你喜欢
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
1楼 2012-10-31 22:07:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-01 06:59:27
当使用双酶切做连接时，如果酶切比较完全，而且连接体系载体：目的片段比例合适，阳性克隆可能接近100%。所以我只有在自连概率大的时候才做蓝白斑筛选。

问题是只是单酶切啊，纠结
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
3楼2012-11-01 10:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-02 13:47:16
当使用双酶切做连接时，如果酶切比较完全，而且连接体系载体：目的片段比例合适，阳性克隆可能接近100%。所以我只有在自连概率大的时候才做蓝白斑筛选。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-01 06:59:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-02 13:47:27
引用回帖:
3楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-01 10:55:08
问题是只是单酶切啊，纠结...

你是否把载体做了去磷酸化处理？如果这样载体不能自连，必需和插入片段连。要么就是你的目的片段也有抗性筛选基因，也可能使筛选板上基本是阳性克隆。当然，如果你的x-gal失效了的话另当别论。
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-01 14:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-01 14:04:42
你是否把载体做了去磷酸化处理？如果这样载体不能自连，必需和插入片段连。要么就是你的目的片段也有抗性筛选基因，也可能使筛选板上基本是阳性克隆。当然，如果你的x-gal失效了的话另当别论。...

额，之前做的时候也怀疑是x-gal失效了，后来换了载体就全是白斑了，pcr也有产物，就是条件老摸索不对，都做过梯度了，还是非特异性太严重
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
5楼2012-11-01 17:10:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +23 稻妻小编 2026-03-26 23/1150 2026-03-30 17:49 by oooqiao
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +8 26要上岸 2026-03-28 8/400 2026-03-30 16:39 by herarysara
[考研] 0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分 +7 Shern—- 2026-03-28 7/350 2026-03-30 16:31 by nothing投稿中
[考研] 303求调剂 +7 DLkz1314. 2026-03-30 7/350 2026-03-30 16:05 by shuang5186
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +18 leaflight 2026-03-24 18/900 2026-03-30 15:59 by wangjy2002
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +8 cccchenso 2026-03-23 8/400 2026-03-30 14:14 by w虫虫123
[考研] 283求调剂（080500） +14 A child 2026-03-27 14/700 2026-03-30 12:06 by 探123
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-03-29 8/400 2026-03-30 10:41 by AZMK
[考研] 调剂求院校招收 +6 鹤鲸鸽 2026-03-28 6/300 2026-03-29 08:15 by fmesaito
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭