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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 若回收胶，跑电泳应加多少样品
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, MolEPI+1, 鼓励应助 2012-10-28 17:54:06
1、胶的浓度主要看你的目的基因的大小，一般1%到2%，大的话浓度就低点，小的话浓度就高点。
2、至于loading buffer的问题，正如楼上所说的，看你的loading buffer是几X的，是几X的loading buffer 最终loading buffer的量就占几分之几。比如6X的，当你上10ul的样时，loading buffer 就上2ul。
3、一般使用6X的loading buffer。
4、要胶回收的话，最好就多上点样喽，一般我是上50ul的样。
祝楼主实验顺利~~~
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keepon
11楼2012-10-28 16:46:59
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小小虫2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-10-28 16:46:59
1、胶的浓度主要看你的目的基因的大小，一般1%到2%，大的话浓度就低点，小的话浓度就高点。
2、至于loading buffer的问题，正如楼上所说的，看你的loading buffer是几X的，是几X的loading buffer 最终loading buff ...

我现在是新手，碰到了问题，今天刚做回收，检测时亮度还可以，但是回收时，在紫外灯下目的带很弱。我跑的是50ul，分了两个孔，没有加loading buffer，胶的溶度在1%，不过我还是回收了，把回收的片段放在-20度下。因为不知道接下来怎么办？要不要继续连接，有人给我好的建议吗？
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12楼2012-11-01 21:22:55
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 小小虫2012 at 2012-11-01 21:22:55
我现在是新手，碰到了问题，今天刚做回收，检测时亮度还可以，但是回收时，在紫外灯下目的带很弱。我跑的是50ul，分了两个孔，没有加loading buffer，胶的溶度在1%，不过我还是回收了，把回收的片段放在-20度下。因 ...

我觉得楼主回收后跑的条带还行的话，可以测一下DNA浓度，然后再看一下要不要做连接。。。
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keepon
13楼2012-11-02 08:20:38
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me-Jemmy

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们在做切胶回收的电泳时，将pcr产物全部用于点样，一般是25ul，6Xloading buffer加6.25ul，
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坚持做好手上的任何事
14楼2012-11-02 10:00:46
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小小虫2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-02 08:20:38
我觉得楼主回收后跑的条带还行的话，可以测一下DNA浓度，然后再看一下要不要做连接。。。...

那一般做200-1000bp以内的片段回收，胶的浓度大概是多少合适啊？还有点样时要不要加buffer，我是用RNA反转录做克隆的。
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15楼2012-11-02 10:04:39
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 小小虫2012 at 2012-11-02 10:04:39
那一般做200-1000bp以内的片段回收，胶的浓度大概是多少合适啊？还有点样时要不要加buffer，我是用RNA反转录做克隆的。...

一般胶浓度在1%到2%之间，片段大的话浓度就低点，片段小的话浓度就高点啦，你这个片段可以用1.5%到2%之间的浓度的胶，其实这个没多大影响。。。
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keepon
16楼2012-11-02 13:57:43
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