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zhangyehong

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关疏水层析的问题

求助,我近期从发酵液中分离脂肪酶,过完离子柱后,过疏水层析,用的是GE akta系统,疏水预装柱,洗脱液用的是10%的硫酸铵和磷酸缓冲液,但是上样后,硫酸铵洗出了一个大峰,但是后来用缓冲液洗不下来目的蛋白,因为我的样品有颜色,所以从柱子上看到样品还挂在柱子上,不知道什么原因,想求助一高手,实在没辙了,希望和纯化蛋白的高手交流交流。

[ Last edited by wizardfan on 2012-10-25 at 07:36 ]
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yitonghui

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得还是你疏水填料选择的问题,原来我做的时候,我是把丁基、苯基、辛基等几种都试一下,感觉你的蛋白是挂的太结实了
;换丁基疏水试试,我倒觉得不能直接用水洗,蛋白在纯水中性质难以保证,特别是浓度高点时容易析出,另外中性ph值也不一定适合你蛋白。
15楼2012-10-30 21:27:43
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