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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用ＣＴＡＢ法中含有的PVP提取叶子中的ＤＮＡ？
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球球爱跳

铁虫 (小有名气)

[求助] 用ＣＴＡＢ法中含有的PVP提取叶子中的ＤＮＡ？

我用ＣＴＡＢ法提取大豆叶子中的DNA时，在第一步水浴一个小时后离心后，绿色的络合物在上面，为什么是在上面的? 我加的PVP是2% 和2%的巯基乙醇，那层绿色的东西在上面我怎么取上清啊？请大侠们指点一下吧
我用传统的方法提取DNA怎么这么难呢 怎么都提取不出来，大豆叶就更提取不出来了呜呜
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1楼2012-10-22 14:52:02
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oranzxc

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加等量酚氯仿再离心吸上清
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2楼2012-10-22 16:38:44
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球球爱跳

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by oranzxc at 2012-10-22 16:38:44
加等量酚氯仿再离心吸上清

好的 我试试谢谢你
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3楼2012-10-23 17:01:40
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gaorongchao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这是前几步，我用来提水稻的DNA没有任何问题

①        取一离心管，加入7 ml 裂解缓冲液和70 μl巯基乙醇，称重。
② 剪取拟南芥的幼嫩叶片约1 g，剪碎置于研钵中，用液氮脆化后充分研磨至细粉末状。快速移入离心管中，称重，混匀。
③ 加入120 μl RNase (100mg/mL)，充分混匀。再加入0.2 ml 15%的SDS溶液，充分混匀后于65°C下水浴30 min。
④ 12,000 rpm，离心10 min。取上清。加入等体积苯酚/氯仿/异戊醇混合液（25:24:1），充分混匀。
⑤ 12,000 rpm，离心10 min。取上清，加入等体积氯仿，充分混匀。
⑥ 12,000 rpm，离心10 min。取上清，加入0.8倍体积的异丙醇，颠倒混匀。于-20°C静置45 min，用于沉淀DNA。
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good，luck，workhard
4楼2012-10-23 18:14:12
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