应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于DTNB的使用
81/1返回列表
查看: 3577  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Mr泡面

金虫 (小有名气)

[求助] 关于DTNB的使用

本人正在做酶的巯基含量测定，查了很多文献都是用DTNB对酶巯基数目进行测定，发现几个问题：
1、原先是用pH6.8的缓冲液配制的DTNB与脲酶进行反应，结果在412nm处不显颜色。2、改在pH8的缓冲液中脲酶与DTNB进行反应，发现随着DTNB的浓度越高，反应液显色越深，但是本底（脲酶的配制溶液+DTNB液）也基本显示一样的颜色。
3、怀疑DTNB在pH8的液体中会显色，所以直接把DTNB调至pH=8，也显示一样的颜色。
4、之前也有用过半胱氨酸和DTNB在pH6.8的时候进行反应，结果马上显色，在412nm处有很高的吸光度。
想问一下各位，DTNB的使用pH有没有什么特殊的要求，是不是在pH8或者某个pH值下会有显色呢？还有，脲酶算不算巯基丰富的酶，我查了很多文献，基本上人家测脲酶中的巯基都是用DTNB的，求解答，谢谢

[ Last edited by Mr泡面 on 2012-10-19 at 17:01 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

乙酰胆碱酯酶

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-19 16:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr泡面

金虫 (小有名气)
自顶下
回复此楼
2楼2012-10-19 22:11:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

enoch_lei

铜虫 (初入文坛)
你配置DTNB使用的的是多少浓度的pH8.0 buffer, DTNB浓度是多少？我做过一次，10mM DTNB stock in 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, diluted into 0.2 mM DTNB in buffer, then add certain amount of  thiol in to 2 ml 0.2 mM DTNB, make sure DTNB is excess and make sure total obs is lower than 1.2, it worked out for me.
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-10-20 05:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr泡面

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by enoch_lei at 2012-10-20 05:00:25
你配置DTNB使用的的是多少浓度的pH8.0 buffer, DTNB浓度是多少？我做过一次，10mM DTNB stock in 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, diluted into 0.2 mM DTNB in buffer, then add certain amount of  thiol in to 2 ml 0. ...

我用的0.4M的PBS，DTNB用到很高的浓度
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-20 09:15:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr泡面

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by enoch_lei at 2012-10-20 05:00:25
你配置DTNB使用的的是多少浓度的pH8.0 buffer, DTNB浓度是多少？我做过一次，10mM DTNB stock in 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, diluted into 0.2 mM DTNB in buffer, then add certain amount of  thiol in to 2 ml 0. ...

请问你是用含巯基的化合物还是酶类？
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-20 12:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr泡面

金虫 (小有名气)
顶
6楼2012-10-20 18:27:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

enoch_lei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Mr泡面 at 2012-10-20 09:15:25
我用的0.4M的PBS，DTNB用到很高的浓度...

你看看文献一般DTNB加多少？一般可能20倍蛋白的量就好，你的buffer pH是多少啊？你可以单扫一下DTNB，然后扫一下DTNB加蛋白，我觉得你有可能DTNB量太高了，给你发一篇文献，你看看，http://www.jbc.org/content/276/36/33588.full
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Mr泡面
7楼2012-10-21 04:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr泡面

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by enoch_lei at 2012-10-21 04:51:51
你看看文献一般DTNB加多少？一般可能20倍蛋白的量就好，你的buffer pH是多少啊？你可以单扫一下DTNB，然后扫一下DTNB加蛋白，我觉得你有可能DTNB量太高了，给你发一篇文献，你看看，http://www.jbc.org/content/27 ...

我用的buffer pH=8.DTNB的浓度最低的有0.4mM。我尝试下把DTNB的量降下来。谢谢！
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-21 09:41:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Mr泡面 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭