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ltj1988

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选后没有目的片段

最近在做重组子的筛选,用的蓝白斑筛选方法,一共做了五个片段的转载,其中三个片段大小在150-200bp,效果都很好;另两个片段大小一个是1100bp左右,另一个是1800bp左右,这两个的平板上也都有白班,但最终的pcr验证却没有想要的片段。五个片段的操作上相同,为什么大片段的就总也转不进去,很费解,求各位高人给分析一下!
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没有白费的辛苦
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ltj1988

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 太极拳 at 2012-10-22 11:56:28
举个例子,假如片段和载体的浓度都是100ng/uL的话,那么都取1uL,两种质量都是100ng,而片段和载体中,分子大的数目反而小,分子小的数目反而大。对不对?比如说,片段2K,载体5K,那么可以认为片段分子数为50,载体 ...

万分感谢,这里真是卧虎藏龙啊,谢谢您!
没有白费的辛苦
14楼2012-10-23 11:19:43
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chenximutao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ltj1988: 金币+1, 有帮助 2012-10-18 18:03:10
提质粒看下转没转进去,有的话酶切验证下~~~
浮尘中的坚持弥足珍贵
2楼2012-10-18 10:56:47
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吴劲松

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
T载体是连1-2kb的片段是没有什么问题的。可能是载体本身有问题了,或者放得比较久,反复冻融了,连长片段能力会下降比短片段更显著。
生命不息,奋斗不止
3楼2012-10-18 11:22:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
由于分子量增加,插入大片段要相应增加插入片段的量,以确保载体:插入片段分子数目约为1:3.
4楼2012-10-18 12:15:36
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